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        1. 上海研謹生物科技有限公司

          β-興奮*類 快速檢測試劑盒說明書

          時間:2020-8-11閱讀:930
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          β-興奮*類

          快速檢測試劑盒說明書

          一、原理

          本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的β-興奮*類藥物將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗β-興奮*類藥抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含β-興奮*類藥物的含量成負相關(guān),與標準曲線比較即可得出相應β-興*劑類藥物的含量。

          二、試劑盒特性

          • 試劑盒靈敏度:   0.1ppb
          • 孵育溫度:       25℃
          • 孵育時間:       30min~15min
          • 樣本檢測下限

          豬   尿 ··········································  0.3ppb

          豬   肉 ··········································  0.6ppb

          • 交叉反應率

          克倫特羅(Clenbuterol)·························  100%

          西馬特羅(Cimaterol)   ·······················  <4%  

          溴布特羅(Brombuterol)   ······················  60%

          馬布特羅(Mabuterol)  ·························  108%

          班布特羅(Bambuterol)  ······················   <5%

          氯丙那林(Clorprenaline)  ·····················  <1%

          沙丁胺醇(Salbutamol)  ·························  75%

          特布他林(Terbutaline )  ······················  25%

          噴布特羅(Penbutolol)  ·························  19%

          妥布特羅(Tulobuterol)  ························  23%

          菲諾特羅(Fenoterol)  ····························<0.1%

          萊克多巴胺(Ractopamine) ······················ <0.1%

          • 樣本回收率

          豬 尿、豬 肉  ····························  90%±30%

          三、試劑盒組成

          1

          微量測試孔

          每條8孔,一板12條

          2

          標準液×6瓶

          (1ml/瓶)

          0ppb

          0.1ppb

          0.3ppb

          0.9ppb

          2.7ppb

          8.1ppb

          3

          酶標記物

          7ml

          紅色帽

          4

          抗體工作液

          10ml

          藍色帽

          5

          底物A液

          7ml

          白色帽

          6

          底物B液

          7ml

          黑色帽

          7

          終止液

          7ml

          黃色帽

          8

          20X濃縮洗滌液

          40ml

          白色帽

          9

          5X樣本提取液

          50ml

          透明帽

          四、所用儀器、試劑

          具備的儀器:酶標儀、離心機、恒溫箱、打印機

          微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl

          試      劑:氫氧化鈉、濃鹽酸

          五、樣本前處理步驟

          • 樣本處理前須知

          (a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

             (b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

          • 樣本前處理需配制:

          配液1   0.2M 鹽酸

          取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L。

          配液2   1M 氫氧化鈉

              稱取4g 氫氧化鈉固體加去離子水定溶至    

              100ml。

          配液3   樣本提取液

              5X樣本提取液用去離子水1:4稀釋。

          • 樣本處理:

          (a)豬肉樣本的處理方法

          • 稱取 2 ± 0.05g 均質(zhì)后的組織于50ml離心管中,加入3ml 0.2M鹽酸(見配液1),充分振蕩3min。
          • 再加入600ul 1M 氫氧化鈉(見配液2)溶液和2.4ml 樣本提取液(見配液3)溶液,充分振蕩3min,室溫4000r/min 以上離心10min。
          • 取20 µl上層液體用于分析。(注:離心后若有脂肪層,去除脂肪層或撥開脂肪層,取清澈液體進行分析)。

          樣本稀釋倍數(shù):  4倍

          (b)豬尿樣本的處理方法

          取20µl清亮尿樣直接測定(如果尿樣渾濁一定

          要過濾或4000r/min離心10min,直至得到清亮

          尿樣),暫不使用的樣本應冷凍保存。

          樣本稀釋倍數(shù):  1倍

          六、 酶標免疫分析程序:

          • 測定前應須知:
          • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20~25℃)。
          • 使用之后立即將所有試劑放回2~8℃。
          • 在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
          • 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
          • 操作步驟:
          • 從2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~25)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
          • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
          • 配液:將 40ml濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去離子水按照 1:19 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
          • 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
          • 加標準品/樣本20µl/孔到各自的微孔中,加入酶標記物50µl/孔,然后加入80µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境反應30min。
          • 將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液250µl/孔洗板4~5次,每次間隔15~30秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
          • 顯色:加入底物A液50µl/孔,再加入底物B液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色15min。
          • 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

          七、結(jié)果判定

          結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含β-*奮劑量成負相關(guān)。

          1、粗略判定:

          用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.1ppb為1.816;0.3ppb為1.415;0.9ppb為0.74;2.7ppb為0.313;8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb~8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb~0.9ppb,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中β-*奮劑類藥物實際濃度。

          2、定量分析

          (1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第--個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

          百分吸光率(%)=

          B

          ×100%

          B0

          B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

          B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

          (2)標準曲線的繪制與計算

          以標準品百分吸光率為縱坐標,以β-*奮劑標準品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中β-興奮*類藥物實際濃度。

          若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。

          八、 注意事項

          • 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫(20~25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
          • 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
          • 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
          • 反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
          • 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
          • 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
          • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。
          • 該試劑盒*佳反應溫度為25℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

          九、儲藏條件和保質(zhì)期

          • 儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。
          • 保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

          提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。

           

           

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