通常所說的紫外光顯微鏡是使用波長在380mm-360nm以下的紫外光形成像的
顯微鏡，這種顯微鏡zui初是被用來增大分辨力的，在現(xiàn)代它主要用于對紫外光有選擇吸收物質(zhì)的顯微分光進(jìn)行光度測量。
在紫外光顯微鏡的應(yīng)用中，首先可能會遇到的就是載玻片、蓋玻片和透鏡的材料問題。通常大多數(shù)的普通玻璃都會大量地吸收340nm以下波長范圍的光，且紫外光不能透過玻璃透鏡形成像；而且所有的透明塑料一般都具有相同的透射特性，因此也不得不使用石英、熒石或鏗熒石等價格昂貴的材料，現(xiàn)代技術(shù)已能用這些材料制造出具有短焦距和高數(shù)值孔徑的紫外光物鏡。
另外，必須采用在紫外光區(qū)域能夠發(fā)射足夠數(shù)量輻射能的高壓氣體放電燈，一般白熾燈在紫外光區(qū)域內(nèi)的輻射產(chǎn)量幾乎為零。同時在紫外光顯微鏡中所使用的標(biāo)本也必須粘在石英載玻片和石英蓋玻片之間，石英載玻片比一般玻璃載玻片更小、更薄，尺寸為25mm ×37.5mm× 0.5mm，且石英蓋玻片也必須比一般玻璃蓋玻片薄得多，大約為0.025mm。在使用這種蓋玻片時，必須先矯正紫外光物鏡。更須注意的是，封藏介質(zhì)和浸潤液也須是能夠透過紫外光的，適宜使用無水甘油。
實(shí)際上，早在1904年柯勒已制造出用于紫外光的石英物鏡，這種物鏡可以透過從一個弧光燈中分離的波長為275nm的紫外光，且對球面差有一定的矯正作用。使用紫外光顯微鏡，在分辨力上確實(shí)顯示出某種程度的提高，這一點(diǎn)是不容置疑的。同時在使用波長為265nm的紫外光拍攝未染色的人骨髓細(xì)胞涂片時，由于細(xì)胞核中的核酸顯示強(qiáng)烈的吸收，細(xì)胞核顯示出清晰的核質(zhì)結(jié)構(gòu)和較高的分辨力，所以盡管照片使用了很高的放大倍數(shù)，仍不能出現(xiàn)空放大。
同時這里要說的是，紫外光顯微鏡在分辨力上的增大并不能*令人滿意。首先由于波長對場深的影響，使得分辨力的增加必須要求是很薄的物體標(biāo)本。此外，在紫外光顯微鏡中對于色差問題的解決，近年來已取得了一些進(jìn)展，主要可通過兩種方法實(shí)現(xiàn)。
一種方法是使用反射物鏡，它通常不會受到色差的損害，但對于較高孔徑物鏡的制造是較為困難的，另一種方法就是采用由不同的紫外光透明材料制造的折射物鏡。在此，zui主要的問題就在于尋找用于這種的復(fù)雜折射系統(tǒng)的不吸收光而且無熒光的透鏡粘著劑，目前已經(jīng)找到一些較為合適的粘著劑，但它們對于溫度上的巨大變化也是較為靈敏的。它要求集光器和目鏡必須滿足不太高的光學(xué)要求，一般采用石英制造；與此同時，光源只能用氣體放電燈，特殊的電弧燈雖能在紫外光的一定區(qū)域進(jìn)行發(fā)射，但是往往也具有較低的光產(chǎn)量；除此之外濾光片和單色儀對于分離所要求的紫外光也是必需的，但同時，這也會引起光能量較大的損失。
那么，能不能使用波長比250nm-350nm的范圍的遠(yuǎn)紫外光來成像呢?實(shí)際上，這種遠(yuǎn)紫外光顯微鏡在物理學(xué)上是有意義的，但在生物學(xué)上卻沒有多大的價值的，因?yàn)榇蠖鄶?shù)生物學(xué)材料在紫外光范圍所顯示的吸收是并不處于遠(yuǎn)紫外的光譜區(qū)域的。
目前所知道的，特別是在260nm-320nm的范圍內(nèi)的紫外光對于許多生物學(xué)材料具有較大的影響，同時在生物界所存在的某些重要的物質(zhì)又在這一光譜區(qū)域內(nèi)表現(xiàn)出了很強(qiáng)的選擇性吸收。所形成的在265nm波長上的反差是由于核酸的特異性吸收，蛋白質(zhì)在280nm-320nm范圍內(nèi)也表現(xiàn)出選擇性的吸收，這就使得使用紫外光分光光度計來進(jìn)行核酸、蛋白質(zhì)等物質(zhì)的分布定位和定量研究進(jìn)一步成為可能，更成為了紫外光顯微鏡的zui重要、zui廣泛的用途。本文來源
http://www.chxwj.com
14
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務(wù)