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1、高溫變性:模板DNA經(jīng)加熱至95℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準備;
2、低溫退火:模板DNA與引物的復(fù)性,模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合;
3、適溫延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以核苷酸為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基互補配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈。
影響擴增的因素:
1、由于各種原因,造成的PCR擴增體系中出現(xiàn)了非目的檢測樣本本身的模板,使得PCR結(jié)果出現(xiàn)假陽性
2、操作錯誤或者誤差造成的模板間交叉污染
3、PCR試劑的污染
4、PCR實驗器材的污染
5、PCR擴增產(chǎn)物的氣溶膠污染
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