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當(dāng)前位置：迪圖（上海）生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證基因功能
一、實(shí)驗(yàn)材料： 疾病對(duì)應(yīng)的細(xì)胞系（或者是原代細(xì)胞），預(yù)算充足情況下可以選擇2種細(xì)胞系，暫定為：A和B細(xì)胞
二、實(shí)驗(yàn)方案：敲低兩種細(xì)胞的目的基因1、過(guò)表達(dá)兩種細(xì)胞的目的基因1（若是miRNA可以使用mimics、inhibitor）
三、干擾片段篩選：2種細(xì)胞都需要篩選（當(dāng)用mimics和inhibitor時(shí)也需要初步篩選表達(dá)效果）
目的基因1干擾片段篩選：針對(duì)目的基因1設(shè)計(jì)并合成3條siRNA及NC，轉(zhuǎn)染細(xì)胞，QPCR篩選出干擾 的片段進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；
四、實(shí)驗(yàn)分組：A或B細(xì)胞
A
A+siRNA NC對(duì)照組
A+siRNA目的基因1干擾
A+過(guò)表達(dá)目標(biāo)基因1
A+過(guò)表達(dá)空載
抑制劑處理濃度1
五、檢測(cè)項(xiàng)目：
細(xì)胞增殖或者細(xì)胞毒性檢測(cè)（CCK法/MMT），
流式檢測(cè)細(xì)胞周期，
流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡，
細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)（transwell），遷移、劃痕
WB檢測(cè)細(xì)胞信號(hào)通路中蛋白的表達(dá)變化，
QPCR檢測(cè)信號(hào)通路中基因的表達(dá)，
免疫熒光檢測(cè)下游信號(hào)通路蛋白
流式多色檢測(cè)某些marker指標(biāo)
Coip檢測(cè)A和B蛋白是否結(jié)合
雙熒光素酶檢測(cè)A和B是否結(jié)合
油紅O染色
生化檢測(cè)：SOD，CAT等
透射電鏡
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