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PCR實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
| PCR實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題匯總 | ||
| 問(wèn)題及現(xiàn)象 | 原因 | 解決方案 |
| 1. PCR 后，管中的液體較少。 | 樣品揮發(fā)，損失 | 確保加熱的蓋子達(dá)到適當(dāng)?shù)臏囟取?/td> |
| 吸取樣本后，盡快蓋上PCR 管的蓋子。防止揮發(fā)。 | ||
| 移液不準(zhǔn)確 | 確保吸取 20 µL 引物混合物和 5 µl Lambda DNA 模板到 PCR 管中。樣本量少時(shí)需要采用高精度移液器。 | |
| 2.在 QuickStrip 中沒(méi)有足夠的樣本 | QuikStrip 已變干。 | 加入 40 μL 水，在裝載前輕輕上下移液以混合均勻。 |
| 3.電泳凝膠上看不到條帶、對(duì)照 DNA 和PCR 產(chǎn)物 | 凝膠未正確制備。 | 確保正確稀釋電泳緩沖液。 |
| 融化瓊脂糖時(shí)需要特別注意較高濃度 (>0.8%) 的凝膠。在倒入凝膠之前，確保溶液 沒(méi)有“團(tuán)塊 "和玻璃狀顆粒，也可以直接使用配置好的預(yù)制膠。省時(shí)省力。 | ||
| 凝膠未正確染色。 | 染色時(shí)注意濃度，實(shí)在不行就重新染色。 | |
| 電泳裝置或電源出現(xiàn)故障。 | 請(qǐng)聯(lián)系電泳儀或電泳設(shè)備供應(yīng)商，幫忙排除故障 | |
| 4.凝膠染色后，DNA 條帶模糊。 | 凝膠沒(méi)有染色足夠長(zhǎng)的時(shí)間。 | 嚴(yán)格按照染色流程說(shuō)明進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。 |
| 5.染色后，條帶可見(jiàn)，但不存在 PCR 產(chǎn)物。 | PCR擴(kuò)增不成功。 | 注意引物設(shè)計(jì)是否合理，DNA聚合酶的加入量是否適宜。 |
| 確保PCR的正確操作，溫度設(shè)計(jì)是否合理。 | ||
| 6.染色后，凝膠上可見(jiàn)條帶和對(duì)照 PCR 產(chǎn)物，其中一部分樣品不存在。 | PCR 反應(yīng)中添加了錯(cuò)誤體積的 DNA 和引物。 | 熟練使用移液器進(jìn)行精準(zhǔn)移液定量，確保移液的準(zhǔn)確度 |
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