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當(dāng)前位置:迪圖(上海)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>迪圖講解熒光定量PCR儀的關(guān)鍵參數(shù)和重要特性
熒光定量PCR儀的關(guān)鍵參數(shù)和重要特性 在選購熒光定量PCR儀時,幾個關(guān)鍵參數(shù)要注意:
1.儀器的檢測通量(Throughput)
首先要考慮實驗室目前需要使用定量PCR儀的頻率。加州大學(xué)舊金山分校癌癥中心的基因組分析設(shè)備負(fù)責(zé)人David Ginzinger檢測過市面上絕大多數(shù)的定量PCR儀。他表示,如果不是大規(guī)模批量使用,比如說主要是用來檢測驗已知基因,那確實不需要昂貴的產(chǎn)品。但是如果是那些需要尋找新藥靶點和疾病標(biāo)記的實驗室,就需要能容納384孔板、運行時間更快的儀器。不過僅有這么一件高通量的儀器是不夠快的,你會發(fā)現(xiàn)樣品制備成為限速的瓶頸。所以高通量的實驗室往往需要進(jìn)一步的自動化儀器,只要“按一下鈕”,儀器就會自動處理樣品、純化核酸和制備PCR模板。
2.多重擴(kuò)增的能力
多重擴(kuò)增越來越熱。實時定量PCR儀也不能幸免。定量PCR儀擁有多個檢測通道,因而儀器就可以檢測同一個樣品槽里多個模板的擴(kuò)增過程。新的LightCycler2.0 有6個檢測通道,比原來多了3個。SmartCyclerⅡ有4個檢測通道。以文庫產(chǎn)品而名滿天下的Stratagene也有一種價格不到Roche的一半、口碑不錯的定量PCR儀Mx3000P,也就是4個檢測通道。不過多重擴(kuò)增并非人人適用,因為它使實驗復(fù)雜化了。
3.軟件
當(dāng)你準(zhǔn)備選擇一臺定量PCR儀,你必須要檢測附帶的軟件。使用方便嗎,是否可以進(jìn)行你所需要的分析,輸出格式有幾種。不過,你需要留意,太容易使用的軟件是不是功能比較簡單而無法進(jìn)行復(fù)雜計算,以前的軟件還需要你做進(jìn)一步分析,新的軟件已經(jīng)可以處理一切了。除了基本功能,部分軟件還可以有更多的功能,比如引物和探針設(shè)計、多重分析設(shè)計、背景校正、數(shù)據(jù)歸一化等等。Roche應(yīng)用科學(xué)部的應(yīng)用和技術(shù)服務(wù)部負(fù)責(zé)人Willian Demyan 就強調(diào):定量PCR是一個幾何擴(kuò)增的過程,開始時一個拷貝之差,結(jié)果就有幾何數(shù)量級之別。
4.靈活性
大規(guī)模繁忙的實驗室設(shè)備*固然令人羨慕,常規(guī)的實驗室同樣可以有精彩的選擇?,F(xiàn)在的供應(yīng)商都擁有眾多的技術(shù)專家,不單了解你的目前需要,還非常周到地為你考慮了以后可能的需求變化,比如提供多種可升級配件和模塊。BioRad的MyCycler就可以選擇模塊而升級為實時定量。ABI的定量PCR儀有多種不同的樣品槽,可以將96孔槽變?yōu)殡p384孔槽而滿足部分高通量的需求。對于剛開始小量做qPCR的實驗室來說,SmartCyclerⅡ定量PCR儀是一個好選擇,一個基本模塊有16個獨立控溫樣品槽,可以同時或者前后分別進(jìn)行16個*獨立的不同實驗, “隨機存取”;當(dāng)實驗室需要較大規(guī)模實驗時,可以非常經(jīng)濟(jì)地升級,從1個增加到6個基本模塊,也就是96樣品孔。雖然不能用96孔板,但是當(dāng)一個學(xué)生開始小量實驗,其他人還可以隨時插進(jìn)去開始自己的獨立實驗,而且互不干擾,就是增加了靈活性。對于剛開始只做少量實驗而且預(yù)算較緊張的實驗室來說是非常靈活的選擇。
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