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超速離心有哪幾種方法?如何選擇?
根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊x擇合適的離心方法:
(1)差速離心:差速離心的分辨率不高,沉降系數(shù)在同一個數(shù)量級內(nèi)的各種粒子不容易分開,常用于顆粒或密度差別較大的組分的分離,或其他分離手段之前的粗制品提取。比如:在碳納米管分散中將單根的碳納米管與成束的碳納米管,以及催化劑顆粒、無定性碳雜質(zhì)等進(jìn)行分離。在進(jìn)行電泳分離或密度梯度離心前現(xiàn)將原始溶液進(jìn)行離心除去大塊雜質(zhì)。
(2)速率區(qū)帶法:速率區(qū)帶離心法適于分離顆粒大小不同而密度相近或相同的組分,如DNA與RNA混合物、溶酶體及過氧化物酶體及密度相近而大小不同的納米顆粒等。
(3)等密度離心法:不同顆粒存在浮力密度差時(shí),在離心力場作用下,在密度梯度介質(zhì)中,顆?;蛳蛳鲁两?,或向上浮起,一直移動到與它們各自的密度恰好相等的位置上形成區(qū)帶,從而使不同浮力密度的物質(zhì)得到分離。等密度離心的介質(zhì)有:氯化銫、硫酸銫、溴化銫、三碘苯衍生物等。等密度離心的操作:介質(zhì)溶液與樣品液混合均勻,足夠時(shí)間離心。介質(zhì)梯度不需預(yù)先制備,離心時(shí)把密度均一的介質(zhì)液和樣品混合后裝入離心管,通過離心形成梯度,讓顆粒在梯度中進(jìn)行再分配。常用來分離提取核酸、亞細(xì)胞器和質(zhì)粒。