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          貝克曼庫(kù)爾特超速流式細(xì)胞分選系統(tǒng)有哪些應(yīng)用

          時(shí)間:2019-3-26 閱讀:1861
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                MoFlo XDP超速流式細(xì)胞分選系統(tǒng)可對(duì)復(fù)雜樣本中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類(lèi)、定量和分離,單次可同時(shí)對(duì)其中一種到四種特定細(xì)胞進(jìn)行超高速分選純化、高通量單克隆分選或細(xì)胞芯片制備。分選后的細(xì)胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細(xì)胞PCR擴(kuò)增或原位雜交等,可進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細(xì)胞之間的差異化研究。硬件中樣本細(xì)胞丟棄的比例低于5%,保證樣本中目標(biāo)細(xì)胞的高回收率,特別適用于干細(xì)胞等極低含量的細(xì)胞研究。

                MoFlo XDP可運(yùn)對(duì)各種真核和原核細(xì)胞、植物細(xì)胞、微生物、浮游生物等進(jìn)行檢測(cè)及分選。專(zhuān)為要求高產(chǎn)量、生物安全性和需要便捷的軟件分析系統(tǒng)的研究者而設(shè)計(jì)。

          一.稀有細(xì)胞應(yīng)用
          標(biāo)記CFSE后通過(guò)尾靜脈移植入受者小鼠體內(nèi),提取受者小鼠脾臟細(xì)胞進(jìn)行移植細(xì)胞檢測(cè)??偣矙z測(cè)2293萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)移植細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)行6代增殖。R7,R8,R9分別為第5,第4,第3代移植細(xì)胞,含量分別在萬(wàn)分之一左右。含量約為1/10萬(wàn)的CD133陽(yáng)性細(xì)胞,分選后直接注射裸鼠皮下進(jìn)行成瘤實(shí)驗(yàn)。

          二、低含量,連續(xù)表達(dá)細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行高速四路分選

          三、腫瘤干細(xì)胞檢測(cè)
              腫瘤干細(xì)胞通常缺乏特異性標(biāo)記,含量又很低,所以很難被檢測(cè)到。腫瘤干細(xì)胞和普通腫瘤細(xì)胞相比,細(xì)胞膜含有有泵動(dòng)功能的ABC等蛋白家族,是腫瘤耐藥和復(fù)發(fā)的決定性因素,因此對(duì)腫瘤干細(xì)胞的研究具有重要意義。
              利用其細(xì)胞膜的泵動(dòng)功能,以小分子活性染料Hoechst33342對(duì)腫瘤樣本進(jìn)行平衡染色,可以檢測(cè)到因?yàn)楸贸鯤oechst33342而著色較少的側(cè)群細(xì)胞(SP,Side Population),此即為腫瘤干細(xì)胞。利用泵蛋白抑制劑Verapami同時(shí)染色,可以看到側(cè)群細(xì)胞比例明顯減少或全部消失,能確認(rèn)SP細(xì)胞的位置。其它干細(xì)胞,如間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、各種成體干細(xì)胞等都可以用這種方法來(lái)進(jìn)行篩選。分選出SP細(xì)胞群和非SP細(xì)胞群,可以研究基因和蛋白表達(dá)差異、致病機(jī)理、藥物篩選等生命科學(xué)的重大課題。

          四、染色體/精子分析分選
              MoFlo/ MoFlo XDP高精度信號(hào)分辨能力(液流穩(wěn)定、激光/電子系統(tǒng)/PMT噪音低/運(yùn)算速度快)和高活性收獲細(xì)胞(系統(tǒng)清潔度好)的功能在染色體和精子分選中得到的表現(xiàn)。對(duì)牛精子分選進(jìn)行人工授精生產(chǎn)小奶牛在畜牧業(yè)上有很大的經(jīng)濟(jì)效益,MoFlo/ MoFlo XDP是可以進(jìn)行這個(gè)應(yīng)用的分選流式細(xì)胞儀,在國(guó)內(nèi)有30臺(tái)MoFlo在日夜運(yùn)轉(zhuǎn)進(jìn)行商業(yè)分選。
              不同染色體之間的DNA含量差異很小,普通的DNA染料無(wú)法區(qū)分23對(duì)染色體。利用高功率355nm紫外激光激發(fā)的HOECHST 33258和高功率458nm激光激發(fā)的CA3分別對(duì)染色體的DNA進(jìn)行染色。不同的染色體因其G-C/A-T堿基對(duì)的比例不同而被分離開(kāi),選中任何一條染色體設(shè)門(mén)后即可進(jìn)行高純度分選。染色體分析分選可以應(yīng)用在高精度FISH、染色體移位、基因定位、染色體序列測(cè)定、染色體相關(guān)蛋白分析等。

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