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NEP062鼎國(guó)自產(chǎn) 動(dòng)物組織 DNA 提取試劑盒
| 參考價(jià): | ￥ 350 |
| 訂貨量: | 1 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- NEP062 產(chǎn)品型號(hào)
- 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 北京市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：3761更新時(shí)間：2024-06-12 12:40:27
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)品介紹
鼎國(guó)自產(chǎn) 動(dòng)物組織 / 細(xì)胞 / 血液基因組 DNA 提取試劑盒 ；350元
純化效果檢測(cè)
取2-5μl得到的DNA產(chǎn)物，0.7%agarose電泳檢測(cè)DNA分子的完整性和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度和純度。
DNA在260nm處有吸收峰，檢測(cè)時(shí)應(yīng)該使OD260值在0.1到1.0之間數(shù)值較準(zhǔn)確。
OD260為1時(shí)大概相當(dāng)于50μg/ml雙鏈DNA，40μg/ml單鏈DNA。
核酸濃度（μg/ml）=OD260×50×稀釋倍數(shù)。
OD260/OD280的值應(yīng)該為1.7~2.0。
常見(jiàn)問(wèn)題分析：
| 常見(jiàn)問(wèn)題 | 可能原因 | 建議 |
| 柱子堵塞 | 裂解消化不充分 | 適當(dāng)延長(zhǎng)Proteinase K消化時(shí)間。 |
| 樣品過(guò)多 | 樣品量不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)所定zui大量；可適當(dāng)增加Proteinase K的用量 | |
| DNA產(chǎn)量低 | 將沉淀倒入柱子導(dǎo)致柱子堵塞 | 加大轉(zhuǎn)速和延長(zhǎng)離心時(shí)間 |
| Wash buffer A、Wash buffer B沒(méi)有加無(wú)水乙醇 | 按說(shuō)明書(shū)加入無(wú)水乙醇 | |
| 洗脫效率低 | 洗脫液使用前于55-65℃預(yù)熱；洗脫液pH值不合適，應(yīng)保證在7.5~8.5 | |
| 樣品裂解不* | 適當(dāng)延長(zhǎng)裂解時(shí)間。 | |
| 樣品不夠新鮮 | 盡量使用新鮮樣品 | |
| DNA純度低 | 消化不* | 樣品量不要超過(guò)規(guī)定范圍；延長(zhǎng)消化時(shí)間，使樣品充分消化 |
| 洗滌不當(dāng) | 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟洗脫 | |
| 乙醇未除干凈 | 適當(dāng)延長(zhǎng)晾干時(shí)間，使乙醇充分揮發(fā) |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒采用自主研發(fā)的*裂解液和酶相結(jié)合的方法裂解材料，具有效率高、性能穩(wěn)定、
重復(fù)性高、速度快等特點(diǎn)。材料被裂解并、經(jīng)蛋白酶K消化后，DNA在高鹽低pH的條件下，
與硅基質(zhì)膜特異性結(jié)合，在低鹽高pH值條件下，吸附的DNA被洗脫下來(lái)。
本試劑盒適用于各種動(dòng)物組織、動(dòng)物細(xì)胞和血液基因組DNA的提取。
提取的基因組DNA可以直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
組成：
| 成分 | 50次 | 注意事項(xiàng) |
| RNase A | 0.5 ml | -20℃保存 |
| Proteinase K | 0.5 ml | -20℃保存 |
| Lysis Buffer A | 35 ml | 室溫低時(shí)可能有白色沉淀產(chǎn)生，加熱溶解即可 |
| Lysis Buffer B | 25 ml | |
| Wash buffer A | 27 ml | 用前加入18 ml 無(wú)水乙醇，充分混勻 |
| Wash buffer B | 16 ml | 用前加入64 ml無(wú)水乙醇，充分混勻 |
| Elution Buffer | 10 ml | |
| 離心柱 | 50個(gè) | 單個(gè)zui大吸附量20 μg |
| 紅細(xì)胞裂解液 | 50ml | 4℃ |
可選試劑
| 編號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| NEP033 | 紅細(xì)胞裂解液 | 100ml | 40.00 |
實(shí)驗(yàn)前試劑準(zhǔn)備
Wash buffer A中加入18 ml 無(wú)水乙醇，充分混勻。
Wash buffer B中加入64 ml無(wú)水乙醇，充分混勻。
儲(chǔ)存條件： 請(qǐng)按照上表中注意事項(xiàng)的條件保存，其他未說(shuō)明的可常溫或4度保存。
步驟：
1、樣品處理
全血：取50-300 μl全血，加入3倍體積的紅細(xì)胞裂解液，震蕩混勻，12000rpm離心1min，
去上清。加入600 μl Lysis Buffer A，震蕩混勻。
禽血：加入10-100 μl禽血，直接加入600 μl Lysis Buffer A，顛倒混勻。
動(dòng)物組織：取20-50mg動(dòng)物組織，液氮研磨或勻漿，加入100 μl PBS重懸樣品，
然后加入到準(zhǔn)備好的600 μl Lysis Buffer A，振蕩混勻。
動(dòng)物細(xì)胞：離心收集105-106個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞，加入100 μl PBS重懸細(xì)胞，
加入600 μl Lysis Buffer A，震蕩混勻。
2、 加入10 μl Proteinase K，60 ℃水浴20 min～40 min，其間顛倒混勻數(shù)次。
如需消化RNA,可待樣品裂解*后加入10 μl RNase A，混勻，室溫放置10 min。
若加入樣品較多，可適當(dāng)延長(zhǎng)水浴時(shí)間，適量增加Proteinase K的量，按比例增加
Lysis Buffer A和Lysis Buffer B量。
3、 加入400 μl Lysis Buffer B，漩渦震蕩30 s。
4、 12,000 rpm離心5 min，將上清轉(zhuǎn)入離心柱中，靜置2 min。
上清可能出現(xiàn)少量白色漂浮物，此為未消化*的細(xì)胞和蛋白質(zhì)。
5、 12,000 rpm離心1 min，棄廢液。
6、 加入700 μl Wash buffer A（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12,000 rpm離心 1min，棄廢液。
7、 加入700 μl Wash buffer B（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇）， 12,000 rpm離 心 1min，棄廢液。
8、 加入500 μl Wash buffer B，12,000 rpm離心1 min，棄廢液。
9、 再次12,000 rpm離心2 min，將離心柱置于新的離心管中，并打開(kāi)離心柱蓋，于室溫或37 ℃恒 溫箱放置5~10min，
直至無(wú)明顯乙醇味。
10、在硅基質(zhì)膜中央加入50～200 μl Elution Buffer或雙蒸水(事先預(yù)熱55～65 ℃)，置于室 溫2 min，12,000 rpm離2 min。
所得液體即為基因組DNA溶液。
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