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上海源葉生物科技有限公司
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IL-16的檢測
2012-5-5 閱讀(785)
即以前的淋巴細胞趨化因子（1ymphocytechemoattractantfactor，LCF）。主要由CD8+T淋巴細胞產生，對T淋巴細胞特別是CD4+細胞具有選擇性趨化作用。
（1）IL-16的誘生
1）分離PBMC，調整細胞濃度為3X106／mL，加入平底培養(yǎng)板中，置37℃5％C02溫箱培養(yǎng)。
2）加入血清素（serotonin，即5-羥色胺），使終濃度為10—4moL／L，培養(yǎng)24h，離心收獲上清用于IL-16活性檢測。
（2）IL-16的測定：可根據IL-16對淋巴細胞的趨化作用測定其活性。
1）用尼龍棉分離法分離外周血中T淋巴細胞。
2）用RPMI-1640培養(yǎng)液將分離的T細胞或CD4+T細胞配成5X106—lO7／mL。
3）取48孔趨化板，底板各孔加入30／uL不同稀釋度的標準品或待測樣品，并設培養(yǎng)液對照孔，均做3復孔。在培養(yǎng)板之上覆以8um孔徑的硝酸纖維素膜，小心讓膜與樣品溶液接觸，不能有氣泡及不讓各孔中的液體相混。
4）蓋上頂板并固定。用0．2mL培養(yǎng)液洗滌各上孔，洗去固定時可能濾人上孔的樣品溶液。在頂板各孔中加入50／uL（約2．5X105～5X105）細胞懸液，置37~C 5％C02溫箱中孵育3h，讓細胞從膜上面向下趨化運動。
5）小心取下膜，洗去膜上表面的細胞，并將膜下表面（粘附著趨化的細胞）向上置玻璃板上，固定細胞，用蘇木精染色細胞。
凸）在高倍顯微鏡下計數(shù)趨化的細胞，以對照孔每視野約10個細胞的濃度，計數(shù)5個視野的全部細胞。取3個重復孔細胞的平均數(shù)。結果以％表示：
趨化％=試驗孔細胞數(shù)／對照孔細胞數(shù)×100％
（3）注意事項：多種細胞因子具有趨化活性，如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等?？捎冕槍Σ煌毎蜃拥闹泻涂贵w作中和實驗對照以了解趨化活性的特異性。實驗時可將適量的中和抗體與細胞因子樣品一起加入底板各孔中，37℃作用15min，然后蓋上頂板，加入細胞。如上進行趨化試驗，并比較中和抗體對照與試驗孔的結果可區(qū)分不同趨化因子的作用。
