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“上海恒遠(yuǎn)”文獻(xiàn)：復(fù)合載蛇床子素支架材料修復(fù)兔下頜骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究
閱讀：428 發(fā)布時(shí)間：2019-5-24| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 392.5KB |
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實(shí)驗(yàn)研究
郭延偉 李松 房殿吉＊
（佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院頜面外科 黑龍江 佳木斯 １５４０００）
［摘要］ 目的：探討 ＢＭＳＣｓ／ＰＲＦ 復(fù)合載蛇床子素支架材料修復(fù)兔下頜骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究的可行性。方法：３６ 只新西蘭大白兔隨機(jī)分為３組，每組１２只，雙側(cè)下頜骨制備缺損模型。Ａ 組植入 ＢＭＳＣｓ／ＰＲＦ 復(fù)合載蛇床子素支架材料；Ｂ 組植入 ＢＭＳＣｓ復(fù)合載蛇床子素支架材料，Ｃ 組單植入納米羥基磷灰石支架材料。分別于術(shù)后２、４、８、１２ 周處死實(shí)驗(yàn)動物，制備組織標(biāo)本，行大體觀察、影像學(xué)分析、ＨＥ 染色、掃描電鏡檢測，并對影像學(xué)分析值及成骨情況加以評價(jià)，對分析數(shù)據(jù)結(jié)果使用ＳＰＳＳ１７．０統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，Ｐ ＜０．０５ 有統(tǒng)計(jì)意義。結(jié)果：影像學(xué)檢查及組織學(xué)染色顯示 Ａ 組骨缺損處愈合程度，成骨速度及其質(zhì)量明顯優(yōu)于 Ｂ組Ｃ 組；掃描電鏡顯示 Ａ 組該復(fù)合材料與組織相容性好，無炎癥刺激反應(yīng)；統(tǒng)計(jì)牙 ＣＴ 分析數(shù)據(jù)及新生骨面積，Ａ 組的成骨情況明顯優(yōu)于Ｂ 組與Ｃ 組（Ｐ ＜０．０５）。結(jié)論：ＢＭＳＣｓ／ＰＲＦ 復(fù)合載蛇床子素支架材料有明顯骨誘導(dǎo)作用，是一種新型復(fù)合材料，可望成為臨床應(yīng)用中修復(fù)頜骨缺損的新型材料。
［關(guān)鍵詞］ 骨 頜骨缺損 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 ＢＭＳＣｓ 富血小板纖維蛋白 ＰＲＦ 蛇床子素 Ｏｓｔｈｏｌ
［中圖分類號］ Ｒ７８２．４
［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］ Ａ
［文章編號］ １６７１—７６５１（２０１２）１１—１０８７—０５
下頜骨功能結(jié)構(gòu)復(fù)雜，而造成其缺損的原因也很多，若不及時(shí)進(jìn)行修復(fù)或修復(fù)不當(dāng)，則常常會造成骨不連或延遲愈合等嚴(yán)重后果。隨著當(dāng)代組織工程學(xué)及分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展，利用干細(xì)胞作為種子細(xì)胞復(fù)合支架材料修復(fù)骨缺損成為近年來研究的熱點(diǎn)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（ＢＭ－ ＭＳＣｓ）以其多項(xiàng)分化的潛能及自身所具有的遺傳背景穩(wěn)定和對機(jī)體無免疫排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)成為理想的種子細(xì)胞［１～３］。ＰＲＦ是繼富血小板血漿（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｒｉｃｈｐｌａｓｍａ，ＰＲＰ）后第２代血小板濃縮液，以血小板凝膠形式呈現(xiàn)，其所內(nèi)含的高濃度的生長因子能促進(jìn)骨組織和軟組織再生修復(fù)，單獨(dú)或聯(lián)合其他生物材料注人硬組織缺損或軟組織創(chuàng)傷處，可以修補(bǔ)缺損，誘導(dǎo)生長，加速局部創(chuàng)傷的愈合并提高愈合質(zhì)量［４～６］。實(shí)驗(yàn)證明，蛇床子素 可 促 進(jìn) 大 鼠 骨 髓 間 充 質(zhì) 干 細(xì) 胞 （ＢＭ －ＭＳＣｓ）的增殖及向成骨細(xì)胞分化并抑制其向脂肪細(xì)胞分化，而且蛇床子素具有促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖的能力［７，８］。本研究將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞，以載蛇床子素的羥基磷灰石為支架材料，結(jié)合ＰＲＦ 中多種生長因子及其誘導(dǎo)并促進(jìn)成骨修復(fù)兔下頜骨缺損，為臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。
１ 材料與方法
１．１ 實(shí)驗(yàn)動物 健康新西蘭大白兔３６ 只，體重２．
０～３．０ｋｇ，３～６月齡，雌雄不限，（由佳木斯大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供），材料及儀器：醫(yī)用納米級羥基磷灰石（上海源葉生物科技有限公司），蛇床子素（上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司），離心機(jī)，ＪＳＭ －６３６０ＬＶ掃描電鏡，倒置相差顯微鏡，牙 ＣＴ。
１．１．１ 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取及培養(yǎng) 無菌條件下，骨髓穿刺針兔雙側(cè)股骨大轉(zhuǎn)子處抽取骨髓３～５ ｍＬ，然后加入 ２０ ｍＬ 的 ＤＭＥＭ 培養(yǎng)液中混勻，過濾雜質(zhì)后以１５００ｒ／ｍｉｎ 離心２０ ｍｉｎ，離心完后取上層骨髓，加入５ ｍＬ 制成 ＤＭＥＭ 培養(yǎng)液制成單細(xì)胞懸液（細(xì)胞數(shù)為１０ 個(gè)／ｍＬ），然后置入容積為３０ ｍＬ 的培養(yǎng)瓶中，加入１０ｍＬ 含２０％新生小牛血清、青霉 素 １００ Ｕ／ｍＬ、硫 酸鏈霉素 １００ｇ／ｍＬ 的ＤＭＥＭ 培養(yǎng)液，再次離心１２００ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ，去上清，計(jì)數(shù)。然后置入３７ ℃、５％ＣＯ２ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)２４ｈ貼壁，呈梭形成纖維樣細(xì)胞生長，７２ｈ后大量細(xì)胞成纖維樣生長，部分區(qū)域成漩渦樣細(xì)胞群，見圖１。在細(xì)胞種植的第４ 天第１ 次換液，以后每２ｄ換液１ 次，細(xì)胞生長７～１０ｄ 后長滿瓶底面積的８０％時(shí)２．５％胰蛋白酶收集計(jì)數(shù)并傳代。
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