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          技術(shù)文章

          人唾液淀粉酶(AMY)說明書

          閱讀:2415          發(fā)布時間:2011-12-20

          人唾液淀粉酶(AMY)酶聯(lián)免疫分析
          試劑盒使用說明書
          本試劑盒僅供研究使用。
          檢測范圍:                                                                                                                  96T
          15U/L - 400U/L
          使用目的:
          本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中唾液淀粉酶(AMY)含量。
          實驗原理
          本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人唾液淀粉酶(AMY)水平。用純化的人唾液淀粉
          酶(AMY)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入唾液淀粉酶(AMY),
          再與 HRP 標(biāo)記的唾液淀粉酶(AMY)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*
          洗滌后加底物 TMB顯色。TMB 在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui
          終的黃色。顏色的深淺和樣品中的唾液淀粉酶(AMY)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下
          測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人唾液淀粉酶(AMY)濃度。
          試劑盒組成
          1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
          2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(800U/L) 0.5ml×1 瓶
          3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
          4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
          5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張  
          6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
          標(biāo)本要求
          1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
          馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
          2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          操作步驟
          1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
          釋。
          400U/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
          200U/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
          100U/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
          50U/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
          25U/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
          2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
          待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
          量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
          3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。    
          4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
          重復(fù) 5次,拍干。
          6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
          7. 溫育:操作同 3。
          8. 洗滌:操作同 5。
          9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
          15 分鐘.
          10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
          11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止
          液后 15分鐘以內(nèi)進行。
          操作程序總結(jié):
          計算
          以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
          OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)
          準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
          注意事項
          1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
          用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
          2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
          3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
          控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
          4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值
          大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
          算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
          5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          6.底物請避光保存。
          7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
          9.本試劑不同批號組分不得混用。
          10.  如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
          保存條件及有效期
          1.試劑盒保存:;2-8℃。
          2.有效期:6個月

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