化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
elisa試驗(yàn)中關(guān)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品裂解的方法
閱讀：1784 發(fā)布時(shí)間：2011-11-1
對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。
2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍（如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。
上海恒遠(yuǎn)主營(yíng)產(chǎn)品/服務(wù):ELISA試劑盒，免疫組化試劑盒，放免試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)品，血清，抗體，培養(yǎng)基，細(xì)胞，生物試劑，實(shí)驗(yàn)耗材等
服務(wù)承諾：
1. 所購(gòu)產(chǎn)品均質(zhì)量保證，有任何質(zhì)量方面的問(wèn)題，一律免費(fèi)包換！
2. 試劑盒方面全程提供技術(shù)指導(dǎo)，還有免費(fèi)代測(cè)的服務(wù)！
3. 本公司出售的任何產(chǎn)品均提供完善的售后服務(wù)，客戶有任何疑問(wèn)，均是一個(gè)工作日，給出解決方案！
歡迎，：,！