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ELISA實驗出現異常的原因分析
閱讀:696 發(fā)布時間:2023-3-20ELISA實驗是我們大家最常見的實驗,也是比較容易出問題的實驗,可能你一不小心,你的整個實驗便是無功能重來那!所以小編給您講解在使用ELISA試劑盒做實驗的時候,有些細節(jié)若是做不好會出現實驗異常,或者效果不佳,那么你有想過是什么原因嗎?
一、白板異常:顯色步驟結束后,酶標板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。
1. 試劑已過效期,或不同試劑盒組分混用(解決方式:檢查試劑的組分及批號,確認未過期以及所有組分均屬對應的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用)。
2. 錯加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B(解決方式:嚴格按說明書的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現象)。
3. 洗板及加樣過程中,酶標受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力(解決方式:確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗干凈)。
4. 終止液誤作洗滌液稀釋或當底物緩沖液配制(解決方式:每次配制時都應看清標簽標明物質)。5. 蒸餾水有問題(解決方式:確認配制洗液的純化水達到要求且未污染,與好蒸餾水比較)?!わ@色弱、靈敏度低:實驗結束后,包括陽性對照、質控在內的所有板孔顏色均較淡。
二、陰陽性對照正常,但質控、參考品或個別弱陽性標本未能檢出。
1. 未達要求的孵育溫度及孵育時間可檢出強陽性標本,但質控或弱陽性標本受 溫度變化影響較大而被未檢出(解決方式:質控品或標本避免反復凍融。標本在一周內使用的,可存于 2-8℃,如需長期保存,應置于-20℃以下保存。質控品應小量分裝,并置于-20℃以下保存)。
2. 質控品或標本高溫放置過久,或被反復凍融致待測物滴度下降,而未能檢出(解決方式:重新設定酶標儀的參數,特別是檢查濾光片是否匹配)。
3. 儀器設定不正確,濾光片不匹配(解決方式:重新設定酶標儀的參數,特別是檢查濾光片是否匹配)。
三、實驗結束后,陰陽性對照正常,質控正常,但臨床標本感覺顯色較弱
1. 待測標本中可能不含強陽性標本,故結果可能是正常的(解決方式:如有懷疑,可復檢)。
2. 標本加入疊氮鈉作為防腐劑(解決方式:酶免實驗中的標本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑)。