二氧化碳培養(yǎng)箱中的微生物往往會(huì)對(duì)培養(yǎng)的結(jié)果產(chǎn)生一定的影響，常見的微生物處理方式包括物理過濾和滅菌，下面讓我們一起來探討兩種方式。

1.1 物理過濾  將箱體內(nèi)氣體通過過濾器循環(huán)，使箱體內(nèi)氣體潔凈度達(dá)到一定的級(jí)別(常見UPLA過濾器為1級(jí)、HEPA 過濾器為 100 級(jí))；主要作用是保持箱體內(nèi)潔凈度，保證培養(yǎng)箱體內(nèi)的環(huán)境，但對(duì)微生物及病毒不起到任何的殺滅作用，僅僅是將箱體內(nèi)的微生物過濾到過濾器內(nèi)，這樣需要對(duì)過濾器進(jìn)行定期更換，采用物理過濾的培養(yǎng)箱更適合于環(huán)境條件較好的實(shí)驗(yàn)室。

1.2 滅菌  殺滅或清除傳播媒介上的所有微生物(包括芽胞)，使之達(dá)到無菌程度。經(jīng)過滅菌的物品稱“無菌物品”，培養(yǎng)箱內(nèi)的無菌處理是指殺滅所謂微生物、病毒等，*避免環(huán)境對(duì)樣本的影響，以及消除不同樣本之間的交叉污染。根據(jù)不同的去除對(duì)象以及應(yīng)用環(huán)境需求，采用有效的方法。

1.2.1 微生物分類

根據(jù)微生物的抵抗能力不同，可將微生物分為如下幾類：

① 細(xì)菌繁殖體  易被一般的消毒劑殺滅，一般革藍(lán)氏陽(yáng)性細(xì)菌對(duì)消毒劑較敏感，采用化學(xué)消毒效果較為明顯； 革藍(lán)氏陰性桿菌則常有較強(qiáng)的抵抗力，一般的化學(xué)消毒效果不明顯，但對(duì)熱敏感，采用熱力學(xué)方法效果明顯。

② 細(xì)菌芽孢和真菌芽胞  有厚厚的孢子壁，對(duì)化學(xué)消毒劑有較強(qiáng)的抵抗力，一般的化學(xué)消毒對(duì)芽孢效力有限；消毒能力強(qiáng)的化學(xué)試劑對(duì)芽孢有一定的殺滅作用，但對(duì)濃度、處理方法等要求嚴(yán)格；常見的方法是采用熱力學(xué)方法。

③ 病毒  種類較多，不同病毒種類對(duì)外界的抵抗能力不同，化學(xué)試劑消毒的效果也不相同，RNA活性受溫度影響明顯，一般采用熱力學(xué)方法去除。

④ 真菌  普遍對(duì)環(huán)境抵抗能力強(qiáng)，一般的紫外消毒方式和化學(xué)試劑消毒達(dá)不到預(yù)期的效果，通常采用熱力學(xué)方法處理，煮沸或使用高壓滅菌燈。

1.2.2 熱力學(xué)滅菌方法

培養(yǎng)箱內(nèi)常見的熱力學(xué)滅菌方法包括干熱滅菌和濕熱滅菌。

①干熱滅菌 將箱體內(nèi)加熱到120℃以上，濕度為20% 以內(nèi)，持續(xù)一定的時(shí)間，通過高溫使蛋白質(zhì)及核酸變性失活，達(dá)到殺滅的目的。有些真菌芽孢，由于厚厚的細(xì)胞壁保護(hù)，能夠抵抗一定的高溫，滅菌不能*。

②濕熱滅菌 在高溫的同時(shí)保持箱體內(nèi)飽和濕度，達(dá)到*滅菌效果。
 

濕熱滅菌相比于干熱滅菌，主要優(yōu)點(diǎn)是：

①濕熱滅菌中的菌體吸收水分，蛋白質(zhì)含水量增高，所需凝固溫度降低，易凝固變性；

②高溫水蒸汽對(duì)蛋白質(zhì)有*的穿透力，從而加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡；

③蒸汽有潛熱存在，能迅速提高菌體的溫度，從而增加滅菌效力。

由此可見，培養(yǎng)箱采用濕熱滅菌是一種可行且效果的滅菌方法，能*消滅細(xì)菌、真菌、孢子、病毒等微生物且沒有二次污染。一個(gè)季度采用一次高溫滅菌，消除潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)。

PART 2/二氧化碳培養(yǎng)箱維護(hù)

居安思危，防患于未然，是智者避免災(zāi)禍的良方，是降低損失的措施。二氧化碳培養(yǎng)箱的日常維護(hù)就是良方，做好以下幾個(gè)方面可以大大降低污染的概率:

2.1  重視管理  安全為目的，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的工作人員應(yīng)明白自身的態(tài)度和人為因素對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的重要性。定期對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校正，至少每年一次。各項(xiàng)數(shù)值一旦固定后，不要隨意調(diào)節(jié)，以免影響箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度的波動(dòng)，降低機(jī)器的靈敏度，同時(shí)還會(huì)影響培養(yǎng)箱內(nèi)的細(xì)胞生產(chǎn)狀態(tài)。

2.2  規(guī)范操作  必須穿著實(shí)驗(yàn)服，換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)必須配帶一次性手套，特別是打開培養(yǎng)箱前，必須先用75%的酒精噴洗雙手，再取出培養(yǎng)箱中的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。顯微鏡下查看細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板后，再放回培養(yǎng)箱時(shí)，同樣也要先噴酒精消毒。培養(yǎng)箱的兩個(gè)門開關(guān)取（放）物要迅速，否則會(huì)影響CO₂的濃度、溫度和濕度，造成污染。切記開門時(shí)不要對(duì)著培養(yǎng)箱說活，大口呼吸甚至是打噴嚏。

2.3  清潔  去除灰塵、污垢和有機(jī)污漬。粉塵、污物以及有機(jī)物是微生物的棲身之所，并可能影響除污染劑（抗菌劑、化學(xué)殺菌劑以及消毒劑）的作用，必須先經(jīng)過清潔才能實(shí)現(xiàn)消毒和滅菌的目的。

2.4  消毒抑菌  醫(yī)用酒精可以很好地起到消毒作用，日?？墒褂?5%的酒精對(duì)培養(yǎng)箱主體和內(nèi)部進(jìn)行擦拭，一個(gè)月一次即可。培養(yǎng)箱內(nèi)部可以放置2%~10%的硫酸銅溶液，硫酸銅溶液具有一定的殺菌抑菌效果。