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產(chǎn)品簡介
詳細(xì)介紹
*B1酶聯(lián)免疫測試盒 96孔板
*B1（AFB1）的檢測
方法一 試紙卡法
1. 適用范圍與檢測意義：本品適用于谷物、飼料、食用油、調(diào)料和發(fā)酵酒等物質(zhì)中*B1（Aflatoxin B1簡寫為AFB1）的快速檢測。*B1是目前已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性很強(qiáng)的一種，對人和若干動物具有強(qiáng)烈的毒性，其毒性作用主要是對肝臟的損害。*B1是大部分食品的必檢項目之一。
2. 測定原理：本品采用高度特異性抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)，通過單克隆抗體競爭結(jié)合AFB1-BSA偶聯(lián)物和樣品中可能含有的AFB1的原理。試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T）的AFB1-BSA偶聯(lián)物和被膠體金標(biāo)記的抗AFB1單克隆抗體。檢出限為5ng/ml。
3. 所用器皿：常量天平±0.1g；蒸發(fā)皿或燒杯；量筒；滴管；移液管；小型粉碎機(jī)；離心機(jī)等。
4. 樣品制備：
4.1 谷物：任取5g以上有代表性樣品并充分碎，準(zhǔn)確稱取2.0g均勻粉碎試樣于配套離心管中，再準(zhǔn)確加入4ml純凈水和4.0ml的乙酸乙酯，將瓶塞蓋緊密封，充分振蕩5min，離心得上清液，將上清液用吸管吸出2.0ml到蒸發(fā)皿或小玻璃杯中，用電吹風(fēng)吹干上清液，再根據(jù)樣品的種類用以下規(guī)定的稀釋液量用鋁箔袋內(nèi)配套吸管反復(fù)沖洗，*溶解杯底所有的固體，此溶解液為樣品提取液即檢測液?？紤]不同樣品對*B1的zui高含量要求，可參考下表用稀釋液溶解杯底固體：
谷物殘留*（ppb）
2.5
5
10
20
使用稀釋液體積（ml）
0.4
0.8
1.6
3.2
4.2 飼料（以殘留*50ppb計算）：任取5g以上有代表性樣品并充分粉碎，準(zhǔn)確稱取2.0g均勻粉碎試樣于配套離心管中，再準(zhǔn)確加入4ml純凈水和4.0ml的乙酸乙酯，將瓶塞蓋緊密封，充分振蕩5min，離心得上清液，將上清液用吸管出0.5ml到蒸發(fā)皿或小玻璃杯中，用電吹風(fēng)吹干上清液，再用2ml的稀釋液量用鋁箔袋內(nèi)配套吸管反復(fù)沖洗，*溶解杯底所有的固體，此溶解液為樣品提取液即檢測液。如果殘留*是30ppb，則用1.2ml的稀釋液溶解；如果殘留*是40ppb，則用1.6ml的稀釋液溶解。
4.3 食用油：稱取2.0g油樣于小燒杯中，用8ml正己烷分次將試樣轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，準(zhǔn)確加入4ml純凈水充分振蕩3min,吸去上層正己烷層,再加入4ml的乙酸乙酯，將瓶塞蓋緊密封，充分振蕩5min，靜置或離心得上清液，將上清液吸出2ml到小玻璃杯中，用電吹風(fēng)吹干，再用稀釋液溶解后為樣品提取液。
4.4 醬油、醋、發(fā)酵酒：稱取25.0g樣品于小燒杯中，用5ml蒸餾水將試樣轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞輕輕振搖3min，靜置分層。放出下層三氯甲烷層，經(jīng)盛有約5g預(yù)先用三氯甲烷濕潤的無水Na2SO4過濾器于蒸發(fā)皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重復(fù)振搖提取，三氯甲烷層一并濾于蒸發(fā)皿中，zui后用少量三氯甲烷洗滌過濾器，洗液并于蒸發(fā)皿中，用電吹風(fēng)吹干。吹干冷卻后，準(zhǔn)確加入稀釋液，將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。
5 測定
5.1 使用前將試紙卡和待檢樣本溶液恢復(fù)至室溫。
5.2 從原包裝袋中取出試紙卡，打開后平放在桌面上，在1小時內(nèi)盡快地使用。
5.3 用滴管吸取待檢樣品溶液，滴加3滴于加樣孔中，加樣后開始計時。
5.4 結(jié)果應(yīng)在10min時讀取，超過12min的時間判讀無效。
6 結(jié)果判定
6.1 陽性：C線顯示出紅色線條，T線不顯色，或C線顯示出紅色線條，而T線顏色非常模糊時，判為陽性。表明：AFB1含量超過樣品允許量。
6.2 陰性：C線顯示出紅色線條，T線同時顯示出紅色線條，且T線顏色接近C線或者深于C線時，判為陰性。表明：AFB1含量低于樣品允許量。
6.3 無效：C線不顯示出紅色線條，而T線顯示出紅色線條，該試紙卡判為無效。建議使用新的試紙卡重新測試。
7 說明
7.1 勿觸摸試紙顯示區(qū)。
7.2 發(fā)現(xiàn)過期，破損，污染時不可再用。
7.3 本品應(yīng)保存在干燥陰涼處（4-30℃），有效期18個月，生產(chǎn)日期見包裝。
7.4 本品為一次性產(chǎn)品，勿重復(fù)使用。
7.5 如遇稀釋液不足，可用蒸餾水加入稀釋液中混勻后使用。
7.6 本品為篩選方法，任何陽性結(jié)果請用其它方法作進(jìn)一步確認(rèn)。
7.7 有條件的實驗室可以用AFB1標(biāo)準(zhǔn)品作為判斷參考。
方法二 酶聯(lián)免疫定量檢測試劑盒法
本測試盒用間接競爭免疫分析法定量測定谷物中AFB1。該測試盒反應(yīng)孔可拆卸，可測單份樣品，也可測多份樣品。定量分析時需有含450nm波長的微孔板酶標(biāo)儀。
1 概要
*是由曲霉菌屬的黃曲霉和寄生曲霉等產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，主要污染玉米、花生、堅果等。天然污染的*以AFB1為主，AFB1屬于強(qiáng)烈致癌物質(zhì)，肝臟是其主要的靶器官，具有*的急性毒性和致癌性。
AFB1檢測方法主要有薄層色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）和ELISA方法，本試劑盒是以應(yīng)用單克隆抗體為基礎(chǔ)的ELISA檢測方法，可以準(zhǔn)確快速檢測糧谷類和花生及飼料中的AFB1。
2 測定原理
本試劑盒采用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，利用間接競爭ELISA法進(jìn)行測定。用抗原包被微孔板，加入AFB1標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、抗AFB1單克隆抗體進(jìn)行孵育后，將未與包被抗原結(jié)合的抗體洗去；再加入酶標(biāo)記的抗鼠IgG抗體孵育，加入顯色液，經(jīng)過終止液終止后，用酶標(biāo)儀在450nm處測定OD值。
3 提供的物品
----微孔板…………………………………………………………… 包被有AFB1-BSA
----5個濃度的AFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液（各0.5mL）
標(biāo)準(zhǔn)1：0ng/mL…………………………………………………………….直接使用
標(biāo)準(zhǔn)2：0.1ng/m…………………………………………………………….直接使用
標(biāo)準(zhǔn)3：0.2ng/mL ………………………………………………………….直接使用
標(biāo)準(zhǔn)4：0.5ng/m………………………………………………….…………直接使用
標(biāo)準(zhǔn)5：1.0ng/m………………………………………….…………………直接使用
----抗AF B1單克隆抗體溶液（6mL）……………………………………………直接使用
----酶標(biāo)物（12mL）..………………………………………………………………直接使用
----顯色液（12mL）..………………………………………………………………直接使用
----終止液（6mL）…………………………………………………………………直接使用
----濃縮洗液（30mL）..……………………………………………………………稀釋使用
4 盒中未提供，需自備物品
----微孔板酶標(biāo)儀（可于450nm處測定）、振蕩器、粉碎機(jī)、微量移液器
----量筒、漏斗、容量瓶、快速定性濾紙
----氯化鈉（分析純）、甲醇（分析純）、去離子水或蒸餾水
5 操作者注意事項
----標(biāo)準(zhǔn)溶液中含有*，應(yīng)特別小心。
----使用過的玻璃容器及*溶液用pH7的次氯酸溶液（10%v/v）浸泡過夜。
----終止液含有硫酸，避免接觸皮膚。
----每次加樣后立即將所有試劑放回2~8 ℃。
----每步加樣時間應(yīng)控制在5min內(nèi)。
----孵育過程中應(yīng)避光。
----不要使用過期試劑盒。
----不要交叉使用不同批號的試劑盒中的試劑。
6 儲存條件
----保存試劑盒于2~8℃。不要冷凍.
----顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
----將不用的微孔板放進(jìn)原鋁箔袋中，置2~8℃保存。
7 試劑變質(zhì)的標(biāo)志
----標(biāo)準(zhǔn)1的吸光度值小于0.5個單位（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8 樣品處理
----樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存。
----取5g粉碎的有代表性的樣品，加1.25g氯化鈉及25mL70%甲醇-水溶液。
----強(qiáng)力振蕩3分鐘。
----用快速定性濾紙過濾。
----取1mL濾液，加水4mL進(jìn)行稀釋。
----取50μL稀釋液進(jìn)行分析。
----*根據(jù)需要可以增減樣品量，但甲醇-水溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增減。
9 酶免疫分析程序
----濃縮洗液為10倍濃縮液，使用時與去離子水或蒸餾水按體積比1:9稀釋后使用。
----取所需數(shù)量的板條插入微孔架，用洗液洗滌微孔板3min×2次。
----加入50mL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到微孔，記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)的位置，每個標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。
----加入50mL抗體溶液到每個微孔（注意移液器管尖不要接觸到孔中的液體，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。
----甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
----每孔加入酶標(biāo)物100mL，37℃孵育60min。
----用洗液洗滌微孔板3min×5次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
----每孔加入顯色液100mL（2滴），37℃孵育10~12min。
----每孔加入終止液50mL（1滴），立即用酶標(biāo)儀在波長450nm處測定吸光度值（OD值）。
注：在定量分析中，顯色液和終止液需要用移液器準(zhǔn)確量取。
10 樣品濃度計算
以標(biāo)準(zhǔn)溶液OD值與標(biāo)準(zhǔn)1OD值的比值為縱坐標(biāo)，所對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（ng/mL）的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品OD值與標(biāo)準(zhǔn)1OD的比值，可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標(biāo)，即為AFB1濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中AFB1濃度C（ng/mL），按下列公式計算出樣品中AFB1含量：
AFB1含量（mg/kg）= C×K
式中：C：稀釋后樣品提取液中AFB1含量（ng/mL）
K：樣品稀釋倍數(shù)（按照本說明書中樣品處理程序方法為25）
11試劑盒主要技術(shù)指標(biāo)及參數(shù)
測試盒zui低檢出濃度0.1ng/mL，回收率70%~120%，與AFB2的交叉反應(yīng)系數(shù)小于1%，與AFG1的交叉反應(yīng)系數(shù)為4.65%，與AFG2交叉反應(yīng)系數(shù)小于1%。試劑盒校正曲線的線性范圍0.1~1.0ng/mL，試劑盒條內(nèi)變異＜10%，條間變異＜15%。