大鼠外周血造血干細(xì)胞分離液

1. 適用于各種動(dòng)物血液及骨髓本系列產(chǎn)品檢索

2. 相關(guān)試劑及耗材

3. 注意事項(xiàng)

4. 應(yīng)用

5. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

6. 貯藏及保存期限

7. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

8. 各種動(dòng)物血液及骨髓干細(xì)胞分離液使用方法說明及圖例

9. HES-TBD550 使用說明

貨號                     品牌              產(chǎn)品名稱          規(guī)格         報(bào)價(jià)

1. 適用于各種動(dòng)物血液 適用于各種動(dòng)物血液 于各種動(dòng)物血液及骨髓本系列產(chǎn)品檢索：：：：

A． 本分離液是敏光型的，在運(yùn)輸和貯藏過程中應(yīng)在 18℃-25℃避光保存，啟封后置 4

℃保存避免微生物污染。另外，本品為真空包裝，未啟封前置于 10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶，

影響分離效果。

B． 待分離的樣本要求新鮮，避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在 20℃水浴

箱中復(fù)溫 20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在 20℃±2℃時(shí)分離效果，且所有操作

過程一定要在無菌條件下進(jìn)行。

C． 由于各品牌離心機(jī)的性能不同，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響

分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)，調(diào)節(jié)離心的時(shí)間，摸索*的分離條件（具體分離條件

各實(shí)驗(yàn)室自定）。

D． 使用無靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

E． *抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑

體積。

 F． 分離過程中所用其他試劑如：羥乙已基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細(xì)胞洗滌液及

紅細(xì)胞裂解液等以我公司產(chǎn)品為*選擇，本公司相關(guān)系列產(chǎn)品無菌、無病毒、無支原體、

低內(nèi)毒素水平且無細(xì)胞毒性，所獲得的細(xì)胞可保持完好的生物活性和完整的細(xì)胞形態(tài)。

4. .. 應(yīng) 4. 用

適用于從動(dòng)物血液或骨髓中分離干細(xì)胞。

5.. . . 產(chǎn)品性能指標(biāo)

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

內(nèi)毒素 ≤0.5...EU/ml

無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 每 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下

6.. . . 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限

18℃-25℃避光保存，有效期兩年。啟封后置 4℃保存，有效期一周。

注：：：：若保證無微生物污染，啟封后可置 4℃長期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時(shí)本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

7. .. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 7. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

A． 試劑

干細(xì)胞分離液、全血及組織稀釋液、細(xì)胞洗滌液、羥乙已基淀粉 550、胎牛血清

B． 器材

玻璃離心管、玻璃滴管

水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)、無菌工作臺(tái)

8.. . . 使用方法說明及圖例 使用方法說明

A.

Ⅰ. 取新鮮抗凝血液或臍帶血與羥乙已基淀粉 550（Cat#aaa：：：：HES----TBD550）按 1:1 比例混合，

37℃反應(yīng) 5-10 分鐘（5ml 以下樣本反應(yīng) 5 分鐘，5ml 以上樣本反應(yīng) 10 分鐘）；

Ⅱ. 取新鮮抗凝骨髓，加入一份細(xì)胞洗滌液（Cat#：2010X1118），混勻后以 400g（約

1500 轉(zhuǎn)/分）離心 5 分鐘，棄去上清。沉淀與羥乙已基淀粉 550（Cat#aaa：：：：HES----TBD550）

按 1:1 比例混合，37℃反應(yīng) 5-10 分鐘（5ml 以下樣本反應(yīng) 5 分鐘，5ml 以上樣本反

應(yīng) 10 分鐘）；

B. 加入為步驟 A 中所得混合液 1/2 體積的全血及組織稀釋液（Cat#：2010C1119）混勻 20

℃-30℃自然沉降 20-30 分鐘，吸取上清備用；

C. 向步驟 B 中所得上清液中加入為其一倍以上體積的細(xì)胞洗滌液（Cat#：2010X1118）混

勻，以 500g（約 1800 轉(zhuǎn)/分）離心 15 分鐘（半徑 15cm 水平轉(zhuǎn)子），棄去上清保留沉淀

細(xì)胞；

D. 向細(xì)胞沉淀中加入全血及組織稀釋液（Cat#：2010C1119）調(diào)整細(xì)胞濃度為 2×108—1×

109個(gè)/ml，小心疊加于細(xì)胞分離液之液面上（混合液：分離液=2:1）；

E. 以 400g（約 1500 轉(zhuǎn)/分）離心 20 分鐘（半徑 15cm 水平轉(zhuǎn)子）；

此時(shí)，離心管中由上至下分為四層：*層；為稀釋液層。第二層；為環(huán)狀乳白色含所

需干細(xì)胞層。第三層；為透明分離液層。第四層；為極少數(shù)紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入

約為其 5-10 倍體積的細(xì)胞洗滌液（Cat#：2010X1118）中，充分混勻后以 500g（約 1800 轉(zhuǎn)

/分）離心 15 分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗滌 2 次既得所需干細(xì)胞。

F. 為獲得純度更高的干細(xì)胞，在步驟 E 中離心完成后可吸取第二層干細(xì)胞層再與羥乙已基淀粉 550（Cat#aaa：：：：HES----TBD550）按 1:1 比例混勻，20℃-30℃自然沉降 20-30 分鐘，收集上清。只能用于科學(xué)研究，不能用于臨床檢測

血小板 100-300×109/L（10 萬-30 萬個(gè)/mm3)

名稱                                                         占白細(xì)胞總數(shù)百分比

嗜中性粒細(xì)胞                                                 30%-70%

嗜酸性粒細(xì)胞                                                 0.5%-5%

嗜堿性粒細(xì)胞                                                0%-1%

淋巴細(xì)胞                                                    20%-40%

白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

單核細(xì)胞                                                    3%-8%

干細(xì)胞                                                    約占外周血細(xì)胞數(shù)量3%