姬姆薩染色液(Giemsa Stain,1:9)

姬姆薩色素(又稱吉姆薩色素)是由天青Ⅱ與伊紅混合而成。Giemsa 染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同，姬姆薩染色液對胞漿著色力較強，能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度，特別是對血液和骨髓細胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒，著色清晰，但是對胞核著色偏深, 核結(jié)構(gòu)顯色不佳，故姬姆薩染液常與瑞氏染液聯(lián)合使用。Giemsa Stain 以進口的姬姆薩色素、甲醇為主要原料，含*襯染劑，經(jīng)研磨配制而成，能呈現(xiàn)出清晰的細胞染色效果，經(jīng)常用于組織切片、血液和細胞涂片、細菌、染色體顯帶、原生動物寄生蟲等染色。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細胞核蛋白和淋巴細胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍或天青結(jié)合，染紫藍色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)。

 Giemsa Stain(1:9)由 10×儲存液和磷酸鹽緩沖液組成，1:9  混合成工作液后

使用；亦可以分開使用，即先用 Giemsa Stain 染色，再經(jīng)磷酸鹽緩沖液處理，亦可以得到

滿意的染色效果。

產(chǎn)品組成：                                                     100ml          500ml              

試劑(A): Giemsa Stain 儲存液(10×)         10ml             50ml       RT 避 光

試劑(B): 磷酸鹽緩沖液                                  100ml           500ml    RT

自備材料：

1、 載玻片、顯微鏡

2、 蒸餾水

3、 甲醇

4、 0.1～0.5%乙酸

操作步驟(僅供參考)：

(一)一步法涂片染色

1、Giemsa 工作液的配制：

按試劑(A):試劑(B)=1:9 混合，即取1份 Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到9份的磷酸鹽緩沖液中充分混勻，即為Giemsa 工作液，為即用型試劑，不易保存，即用即配。

2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定 1～3min。

3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上，滴加 Giemsa 工作液覆蓋涂片，室溫滴染 15～ 30min。

4、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。

5、干燥、鏡檢。

染色結(jié)果：

嗜酸性顆粒        粉紅色

嗜堿性顆粒        紫藍色

中性顆粒          淡紫色

(二)兩步法涂片染色

1、Giemsa 工作液的配制：

按試劑(A):蒸餾水=1:4 混合，即取1 份的Giemsa Stain儲存液(10×)加入到4 份的蒸餾水中充分混勻，即為Giemsa 工作液。Giemsa工作液為即用型試劑，不易保存，即用即配。

2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定 1～3min。

3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上，滴加適量 Giemsa 工作液覆蓋涂片，室溫滴染10～15min。

4、加入等量磷酸鹽緩沖液，輕輕晃動載玻片，室溫靜置5～10min。

5、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。

6、干燥、鏡檢。

染色結(jié)果：

嗜酸性顆粒         粉紅色

嗜堿性顆粒         紫藍色

中性顆粒           淡紫色

(三)組織切片染色

1、Giemsa 工作液的配制：

按試劑(A):試劑(B) =1:9 混合，即取1份Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到9份磷酸鹽緩沖液中充分混勻，即為Giemsa 工作液。Giemsa 工作液為即用型試劑，不易保存，即用即配。

2、新鮮組織立即置于Regaud 固定液固定2天，期間應(yīng)更換1次固定液。

3、3%重鉻酸鉀固定1天。

4、流水沖洗16個小時或過夜。

5、照常規(guī)脫水、包埋。

6、切片厚度約為5μm，常規(guī)脫蠟至水。

7、蒸餾水清洗2次，每次1min。

8、入含Giemsa 工作液染缸，浸染18～24h。

9、蒸餾水稍微清洗。

10、0.1～0.5%乙酸洗1～2min。

11、自來水稍沖洗。

12、用無水乙醇迅速脫水3次，每次5～10s。

13、二甲苯透明，中性樹脂封固。

染色結(jié)果：

細胞核               藍色至紫色

細胞質(zhì)               淡藍色

嗜鉻細胞胞質(zhì)         黃綠色

結(jié)締組織             淡紅色

注意事項：

1、血液涂片或骨髓涂片應(yīng)厚薄均勻，以免影響染色效果。

2、涂片染色中Giemsa 染色后，請勿先去除染液或直接對涂片用力沖洗。

3、如果染色過深或過淺，應(yīng)調(diào)整染色時間或工作液濃度。

4、涂片染色和組織切片染色中，pH值對染色有一定影響，載玻片應(yīng)清潔、無酸堿污染，以免影響染色效果。

5、染色液經(jīng)稀釋后液面應(yīng)金屬光澤則表示染液有染色作用，否則染色液可能失效。

6、組織切片染色中，染色后需用大量0.1～0.5%乙酸急速沖洗，避免浮面沉淀物污染切片后難以洗脫。

7、0.5%乙酸分化常用于Giemsa 組織切片染色，如有必要亦可用于細胞涂片，但其濃度應(yīng)適量下調(diào)。0.5%乙酸分化切片時，切片呈粉紅色即可終止。

8、Giemsa 組織切片染色中，無水乙醇脫水要迅速，否則切片易褪色。

9、涂片染色和組織切片染色中，如需急速獲得結(jié)果，可按Giemsa  Stain儲存液(10×):磷酸鹽緩沖液=1:1 配制 Giemsa 工作液，充分混勻，即為快速Giemsa染色工作液，將染色液滴加于細胞涂片或組織切片上，加熱染色，20～30s后重新加染色液，反復(fù) 5～10 次，其余步驟同上。

10、染色液可重復(fù)使用，但不能多次重復(fù)，若有沉淀物應(yīng)過濾后使用。

11、Regaud 固定液: 按3%重鉻酸鉀:甲醛=4:1 配制，臨用前混勻，1～2 天后失效。

有效期：24 個月有效。

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