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          目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化試劑>>糖與碳水化合物>> P8230嘌呤霉素 糖與碳水化合物

          嘌呤霉素 糖與碳水化合物
          • 嘌呤霉素 糖與碳水化合物
          參考價 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          參考價 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          • 品牌
          • 型號 P8230
          • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
          • 所在地 北京市
          屬性

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          更新時間:2024-08-27 14:22:48瀏覽次數(shù):1741評價

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          CAS 58-58-2 純度 ≥99%
          分子量 544.44 分子式 C22H29N7O5·2HCl
          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 25mg
          貨號 P8230 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油
          主要用途 蛋白質(zhì)合成抑制劑。抑制細(xì)菌、藻類原生物和哺乳動物細(xì)胞生長。
          嘌呤霉素 糖與碳水化合物
          嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑鏈霉菌(Streptomyces alboniger)發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌,各種動物和昆蟲細(xì)胞。

          嘌呤霉素 糖與碳水化合物

          有效期 4年

          溶解性 50 mg/mL in water

          別名 二鹽酸嘌呤霉素;嘌呤霉素鹽酸鹽

          英文名稱 Puromycin

          CAS 58-58-2

          分子式 C22H29N7O5·2HCl

          分子量 544.44

          儲存條件 -20℃

          危險代碼 R:22

          純度 PURITY: ≥99%

          外觀(性狀) 白色粉末

          單位 支

          說明:蛋白質(zhì)合成抑制劑。抑制細(xì)菌、藻類原生物和哺乳動物細(xì)胞生長。

          嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑鏈霉菌(Streptomyces alboniger)發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌,各種動物和昆蟲細(xì)胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機(jī)制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物,能夠與核糖體的A位點結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點結(jié)合后,不會參與隨后的任何反應(yīng),從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

           

          嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAC),賦予機(jī)體對嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

          嘌呤霉素在細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應(yīng)用與慢病毒載體的特性有關(guān),現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下,嘌呤霉素亦可以用來篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。

          溶解性:溶于水,參考濃度50mg/ml。

          使用方法:

          1.建議使用濃度

          哺乳動物細(xì)胞:1-10 μg/mL,濃度需要殺滅曲線來確定;

          大腸桿菌:LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌,使用濃度為125μg/mL。注:使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要的pH值調(diào)節(jié),而且受宿主細(xì)胞本身的影響。

          2.溶解方法

          用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液,經(jīng)0.22 μm濾膜過濾除菌后分裝于-20℃凍存;也可溶于甲醇,配制成10 mg/ml的儲存液。

          3. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定(以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)為例)

          嘌呤霉素有效篩選濃度跟細(xì)胞類型、生長狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的shRNA細(xì)胞株,確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的低濃度嘌呤霉素關(guān)重要。建議初次做實驗的客戶一定要建立適合自身實驗體系的殺死曲線(kill curve)。

          1) Day 1:24孔板內(nèi)以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板,鋪足夠量的孔以進(jìn)行后續(xù)的梯度實驗。37℃細(xì)胞孵育過夜;

          2) Day 2:準(zhǔn)備篩選培養(yǎng)基:含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基(如0-15μg/mL,少5個梯度);b)往孵育過夜后的細(xì)胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基;之后37℃孵育細(xì)胞;

          3) Day 4:更換新鮮的篩選培養(yǎng)基,并觀察細(xì)胞存活率。

          4) 根據(jù)細(xì)胞的生長狀態(tài),約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基;

          5) 每日監(jiān)測細(xì)胞,觀察存活細(xì)胞率,從而確定抗生素篩選開始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或者所有非轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的藥物低濃度。

          4. 哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選

          等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后,細(xì)胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖,以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。

          1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后,將細(xì)胞(原樣或稀釋)置于含有適當(dāng)濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

          注意:當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時,抗生素作用。細(xì)胞過于密集,抗生素產(chǎn)生的效力會明顯下降。進(jìn)行細(xì)胞分盤使其密度不超過25%。

          2)每隔2-3天,移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。

          3)篩選7天后評估細(xì)胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間,這依賴于宿主細(xì)胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。注意:每日進(jìn)行細(xì)胞生長狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選少需要48h,有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。

          4)轉(zhuǎn)移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養(yǎng)皿中,用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細(xì)胞毒性實驗做準(zhǔn)備。

          注意事項

          1)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

          2)嘌呤霉素為有毒化合物,操作時請小心拿放。

           

          參考文獻(xiàn):

          《Rhein enhances the cytotoxicity of effector lymphocytes in colon cancer under hypoxic conditions》 作者:Xiangfei Yuan,Wencong Tian,Yang Hua,Lijuan Hu,Jing Yang,Junmuzi Xie,Jiacai Hu,Feng Wang 期刊:Experimental and Therapeutic Medicine 影響因子:1.448 PMID:30542494

          《CRISPR-Cas9 Mediated RNase L Knockout Regulates Cellular Function of PK-15 Cells and Increases PRV Replication》 作者:Chao Sui, Dandan Jiang, Xiangju Wu, Xiaoyan Cong, Feng Li, Yingli Shang, Jinqiu Wang, Sidang Liu, Hu Shan, Jing Qi, and Yijun Du 期刊:BioMed Research International 影響因子:2.197 PMID:30941371

          《MicroRNA-206 Reduces Osteosarcoma Cell Malignancy In Vitro by Targeting the PAX3-MET Axis》 作者:Fang-Biao Zhan, Xian-Wei Zhang, Shi-Long Feng, Jun Cheng, You Zhang, Bo Li, Li-Zhong Xie, and Qian-Rong Deng 期刊:Yonsei Medical Journal 影響因子:1.759 PMID:30666838

          《miR-196a-5p promotes metastasis of colorectal cancer via targeting IκBα》 作者:He Xin, Chuanzhuo Wang and Zhaoyu Liu 期刊:BMC Cancer 影響因子:3.288 PMID:30621631

          《High methylation of the 4-aminobutyrate aminotransferase gene predicts a poor prognosis in patients with myelodysplastic syndrome》 作者:Guangjie Zhao Nianyi Li Shuang Li Wanling Wu Xiaoqin Wang Jingwen Gu 期刊:International Journal of Oncology    Pages: 491-504 影響因子:3.333 PMID:30535457

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          《Prognostic implications and oncogenic roles of MYBL2 protein expression in esophageal squamous-cell carcinoma》 作者:Hui Qin,Yunyun Li, Hongyan Zhang,Feng Wang, Hongliu He, Xue Bai,and Shanshan Li 期刊:OncoTargets and Therapy 影響因子:3.046 PMID:30881043

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