染色體步移技術(shù)(genome walking)是一種關(guān)緊的分子生物科學(xué)研討技術(shù),運用這種技術(shù)可以管用取得與已知序列相鄰的未知序列。
染色體步移技術(shù)主要有以下幾方面的應(yīng)用:
①依據(jù)已知的基因或分子標(biāo)記蟬聯(lián)步移,取得人、動物和植物的關(guān)緊調(diào)節(jié)控制基因,可以用于研討結(jié)構(gòu)基因的表現(xiàn)調(diào)節(jié)控制。如離合克隆開始工作子并對其功能施行研討;
②步查取得新物種中基因的非守舊地區(qū)范圍,因此取得完整的基因序列;
③鑒定T-DNA或轉(zhuǎn)座子的插進去位點,鑒定基因槍轉(zhuǎn)基因法等轉(zhuǎn)基因技術(shù)所造成的外源基因的插進去位點等;
④用于染色體測序辦公中的窟窿眼兒填補,取得完整的基因組序列;
⑤用于人工染色體PAC、YAC和BAC的斷片搭接。
對于基因組測序已經(jīng)完成的少量物種(如人、小鼠、線蟲、稻子、擬南芥等)來說,可以輕松地從數(shù)值庫中找到某物種已知序列的翼側(cè)序列。不過,對于大部分?jǐn)?shù)有生命的物質(zhì)而言,在不成解他們的基因組序列曾經(jīng),想要曉得一個已知地區(qū)范圍兩側(cè)的DNA序列,只能認(rèn)為合適而使用染色體步移技術(shù)。
以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的染色體步移的主要問題是,電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱在預(yù)先不成解未知地區(qū)范圍序列信息的事情狀況下,怎么樣預(yù)設(shè)兩個特別優(yōu)異性引物來擴增未知地區(qū)范圍。而傳統(tǒng)的染色體步移辦法,如:逆向PCR法、連署接頭法等,都有操作復(fù)雜、非特別優(yōu)異性擴增、連署速率劣等弊病。
TaKaRa新產(chǎn)品之Genome Walking Kit試藥盒是一種依據(jù)已知基因組DNA序列,取得翼側(cè)未知序列的試藥盒。相對于其他傳統(tǒng)辦法,本試藥盒具備、簡單方便、特別優(yōu)異性高、銳敏度高、一次性取得的未知序列較長等*的地方。其主要原理是依據(jù)已知DNA序列,作別預(yù)設(shè)三條同向且退火溫度較高的特別優(yōu)異性引物(SP Primer),與試藥盒中供給的四種通過*特別預(yù)設(shè)的退火溫度較低的兼并引物,即AP1、AP2、AP3、AP4施行熱錯誤稱PCR反響。
一般事情狀況下真空干燥箱,那里面至少有一種兼并引物可以與特別優(yōu)異性引物之間利用退火溫度的差別施行熱錯誤稱PCR反響,經(jīng)過三次巢式PCR反響即可取得已知序列的翼側(cè)序列。假如一次實驗取得的長度不可以滿意實驗要求時,還可以依據(jù)步移取得的序列信息,接著施行翼側(cè)序列取得。這個之外,本試藥盒中還包括Control DNA及Control Primer,可以便捷施行Control實驗。
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