光照培養(yǎng)箱多管發(fā)酵具體指哪些?
1．多管發(fā)酵法
初發(fā)酵實驗發(fā)酵管內(nèi)裝有單倍或三倍乳糖蛋白胨培育液，并在內(nèi)倒置有小玻璃管。每個樣品用三個不一樣的水樣量接種，同一接種水樣量要有五管，將水樣別離接種到裝有乳糖蛋白胨培育液的發(fā)酵管中，在37℃±0.5℃下培育24h±2h。乳糖能起挑選效果，因為許多細菌不能發(fā)酵乳糖，而大腸菌群能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣。培育液中參加溴甲酚紫作為酸度指示劑，細菌產(chǎn)酸后，培育液即由本來的紫色變成黃色。產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管標(biāo)明實驗陽性，如在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不顯著，可輕拍發(fā)酵管，有小氣泡升起為陽性。
復(fù)發(fā)酵實驗細微振動初發(fā)酵實驗陽性成果的發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)將培育物(2-3環(huán))轉(zhuǎn)接到EC培育液中，在44.5℃±0.5℃下培育24h±2h(進步培育溫度可構(gòu)成不利于來自自然環(huán)境的大腸菌群的成長)。培育后當(dāng)即調(diào)查，發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實為糞大腸菌群陽性。
2．濾膜法
濾膜是一種微孔性濾膜，孔徑0.45μm。將水樣寫入已滅菌的放有濾膜的過濾器中，經(jīng)過抽濾，細菌即被截留在膜上，然后將濾膜貼于M-FC培育基上，在44.5℃±0.5℃下培育24h±2h。糞大腸菌群菌落在M-FC培育基上呈藍色或藍綠色，其他非糞大腸菌群菌完工灰色、淡黃色或無色。正常狀況下，因為溫度和玫瑰酸鹽試劑的挑選性效果，在M-FC培育基上很少見到非糞大腸菌菌落。
二．兩種辦法的注重事項
1．培育溫度的需求總大腸菌群中的細菌除日子在腸道中外，在自然環(huán)境中的水與土壤中也常常存在，但此等在自然環(huán)境中日子的大腸菌群培育的最合適溫度為25℃左右，如在37℃培育則仍可成長，但如將培育溫度再升高至44．5℃，則不再成長，而直接來自糞便的大腸菌群細菌，習(xí)慣于37℃左右成長，如將培育溫度升高至44．5℃仍可持續(xù)成長。因而，可用進步培育溫度的辦法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)別，兩種辦法也都依據(jù)此理。將接種好的樣品或裝有濾膜的培育基放入光照培養(yǎng)箱時，箱內(nèi)溫度必定要到達所需求的溫度(44.5±0.5℃)時，方可放入。如用恒溫水浴箱時，其水面要高于接種物面，放濾膜的培育皿要沉到水浴箱底部。
2．加氯水樣的處置經(jīng)氯處置消毒過的水樣，水中富含必定量的余氯，使大腸菌群處于受損或受按捺狀況，在收集水樣時應(yīng)提早在采樣瓶中加硫代硫酸鈉，硫代硫酸鈉能夠脫氯，使受損的細菌得以復(fù)蘇與修正，然后避免呈現(xiàn)計數(shù)成果偏低乃至假陰性的表象。此外余氯對濾膜法培育的細菌其按捺效果尤為顯著，所以抽濾時應(yīng)對水樣進行許多無菌水稀釋，以削減余氯的殘留。
3．樣品的保管采樣用的容器運用前應(yīng)蓋好瓶蓋，用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好，置枯燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min。采樣后水樣的正確保管也很重要，如保管不妥可使樣品中的大腸菌群細菌或在必定條件下再成長，這些都將影響檢測成果的精確性。檢測室接到水樣后，應(yīng)當(dāng)即檢測，如因故不能檢測時，應(yīng)當(dāng)即將樣品置于冰箱內(nèi)(2℃-10℃)并于2小時內(nèi)檢測。
4．培育物質(zhì)的制備與保管
?、?多管發(fā)酵法所運用的培育液在分裝于各發(fā)酵管中后，應(yīng)將發(fā)酵管趕快放于高壓蒸汽滅菌器中，在115℃滅菌20min(注重：這個溫度也應(yīng)操控好，既到達滅菌的效果，還要避免培育物質(zhì)分化丟失)，然后儲存于冰箱或暗處備用。
?、?濾膜法所選用的M-FC培育基多運用外購的制品，培育基中苯胺藍的純度和質(zhì)量往往影響菌落的色彩，因而，無菌包裝的成套培育基在運用前，*先接種典型糞大腸菌，以調(diào)查比照菌落的色彩，來判定其穩(wěn)定性。
5．成果核算
?、?多管發(fā)酵法的成果是依據(jù)不一樣接種量的發(fā)酵管所呈現(xiàn)陽性成果的數(shù)目，從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù)，來核算每升水中糞大腸菌群細菌的MPN值。MPN是“MostProbableNumber"的縮寫，指最大能夠數(shù)，它是依據(jù)核算學(xué)理論，估量水體中的菌群密度和清潔質(zhì)量的一種辦法，所以精確判別不一樣接種量發(fā)酵管的陽性數(shù)是非常重要的，不然將招致較大差錯。
?、?濾膜法的成果是計數(shù)濾膜上呈藍或藍綠色的菌落，來核算出每升水樣中的糞大腸菌群數(shù)。所認為便于計數(shù)，削減差錯，抱負的水樣體積是一片濾膜上成長20-60個糞大腸菌群菌落。
三．在實踐中的運用討論
1．檢測辦法對樣品的適用性
?、?多管發(fā)酵法因為只需求依據(jù)水樣的取樣量來決定將樣品培育于何種培育液中(單倍或是三倍乳糖)進行培育，因而理論上可適用于各種水樣，但因為受發(fā)酵管容積的約束，其更適合檢測水源水、地表水和污染源廢水(取樣量不大)，并且若是接種的水樣量不是MPN表中的三種接種量時，還需用公式進行換算。
?、?濾膜法首要是選用抽濾設(shè)備將細菌截留在濾膜上，然后將濾膜貼附在固體培育基上培育，因而可用于檢測體積較大的水樣，但受濾膜孔徑的約束，在檢測混濁度高(污染源廢水)、非大腸桿菌類細菌密度大(河湖水)的水樣時，對菌落計數(shù)核算有必定影響，此外，如水樣中有毒性物質(zhì)較高，也會在濾膜上構(gòu)成累積，按捺細菌培育。
2．檢測時刻及操作進程的繁瑣度
?、?多管發(fā)酵法需求經(jīng)過初發(fā)酵實驗和復(fù)發(fā)酵實驗兩個進程后才干依據(jù)不一樣接種量的發(fā)酵管所呈現(xiàn)陽性成果的數(shù)目，從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù)，然后最終得出每升水中糞大腸菌群細菌的MPN值。能夠看出，多管發(fā)酵法的培育時刻至少需求2天以上，且對接種量、每一接種量的發(fā)酵管數(shù)都有嚴格需求(MPN表多選用9管、15管發(fā)酵管，接種量為10ml、1ml、0.1ml3種體積查詢)，不然成果難以核算。
?、?濾膜法當(dāng)前首要選用成套NPS(濾膜 培育基 培育皿)進行細菌截留和培育，操作簡略，運用時只需用少數(shù)無菌水潮濕培育基墊即可運用，培育時刻1天左右，能比多管發(fā)酵法更快地取得成果，還具有高度的再現(xiàn)性和精密性。此外因為選用單片無菌包裝，節(jié)省了滅菌時刻，還避免操作進程中的二次污染，并且長有菌落的濾膜片可在紫外線滅菌、枯燥后作為檢測記載永世保管，更契合計量認證規(guī)范。
3．檢測本錢的思考
?、?多管發(fā)酵法所用的發(fā)酵管、小玻璃倒管和塑料蓋可在清除、高壓滅菌和紫外線消毒后重復(fù)運用，液態(tài)培育基可自行制造或選用市售已配好的歸納培育基，檢測的本錢不高。因為其辦法較繁瑣，當(dāng)前正有一種經(jīng)過USEPA認證的水和廢水中糞大腸菌群檢測的規(guī)范辦法逐漸替代它，這種在美國、日本和加拿大等國家廣泛運用的檢測技能在國內(nèi)也有必定運用(北京市環(huán)境檢測中間、北京市排水集團檢測中間等)，這種辦法就是運用IDEXXcolilert試劑來檢測水中糞大腸菌，盡管它是依據(jù)多管發(fā)酵法原理，不過卻將其操作大大簡化了。當(dāng)然，伴跟著操作的簡化，檢測本錢也大幅進步，設(shè)備基本上滿是進口的，前期投入大概在8萬元至10萬元人民幣之間，且因為采樣瓶、試劑和密封計數(shù)盤都是一次性運用，單個樣品的檢測本錢也將到達200元人民幣左右。
?、?濾膜法首要選用的抽濾設(shè)備(拋光不銹鋼3歧管過濾器、500ml漏斗、無油隔閡真空正壓兩用泵和手動無菌水加液器)也基本上來自于進口，當(dāng)前許多單位運用的都是德國賽多利斯公司出產(chǎn)的產(chǎn)物，其前期投入大概在2萬元至3萬元人民幣左右(包含100套無菌包裝的NPS，12元/每套)。因為每個樣品需選用3種不一樣的稀釋比進行過濾培育，要運用3套NPS，所以單個樣品的檢測本錢在50元人民幣左右。
四．主張
從兩者在幾個方面的比擬能夠看出，濾膜法具有省時、省料、設(shè)備需求低以及能夠收集較多的檢測水樣等長處，并且跟著應(yīng)急檢測機制的樹立，當(dāng)需求咱們對各種突發(fā)環(huán)境污染事情(病院廢水能否加氯處置、河湖能否受日子廢水污染)敏捷做出反響，更快地取得必定成果的時分，其長處越發(fā)杰出。
因而在實踐檢測工作中，咱們能夠?qū)V膜法作為首要檢測辦法，并采納辦法戰(zhàn)勝其易受水樣混濁度、其它菌種和有毒物質(zhì)攪擾的局限性，疾速反映水質(zhì)狀況，為監(jiān)督管理部門供給科學(xué)數(shù)據(jù)；將多管發(fā)酵法作為輔佐辦法，經(jīng)過其來對濾膜法培育的可疑菌種進行判定，然后使檢測成果愈加精確，只要這樣，水中的細菌學(xué)檢測才干順暢、高效的展開。
光照培養(yǎng)箱在多管發(fā)酵法注重事項
1．樣品的保管采樣用的容器運用前應(yīng)蓋好瓶蓋，用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好，置枯燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min。采樣后水樣的正確保管也很重要，如保管不妥可使樣品中的大腸菌群細菌或在必定條件下再成長，這些都將影響檢測成果的精確性。檢測室接到水樣后，應(yīng)當(dāng)即檢測，如因故不能檢測時，應(yīng)當(dāng)即將樣品置于冰箱內(nèi)(2℃-10℃)并于2小時內(nèi)檢測。
2．培育溫度的需求總大腸菌群中的細菌除日子在腸道中外，在自然環(huán)境中的水與土壤中也常常存在，但此等在自然環(huán)境中日子的大腸菌群培育的最合適溫度為25℃左右，如在37℃培育則仍可成長，但如將培育溫度再升高至44．5℃，則不再成長，而直接來自糞便的大腸菌群細菌，習(xí)慣于37℃左右成長，如將培育溫度升高至44．5℃仍可持續(xù)成長。因而，可用進步培育溫度的辦法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)別，兩種辦法也都依據(jù)此理。將接種好的樣品或裝有濾膜的培育基放入光照培養(yǎng)箱時，箱內(nèi)溫度必定要到達所需求的溫度(44.5±0.5℃)時，方可放入。如用恒溫水浴箱時，其水面要高于接種物面，放濾膜的培育皿要沉到水浴箱底部。
3．加氯水樣的處置經(jīng)氯處置消毒過的水樣，水中富含必定量的余氯，使大腸菌群處于受損或受按捺狀況，在收集水樣時應(yīng)提早在采樣瓶中加硫代硫酸鈉，硫代硫酸鈉能夠脫氯，使受損的細菌得以復(fù)蘇與修正，然后避免呈現(xiàn)計數(shù)成果偏低乃至假陰性的表象。此外余氯對濾膜法培育的細菌其按捺效果尤為顯著，所以抽濾時應(yīng)對水樣進行許多無菌水稀釋，以削減余氯的殘留。
4．培育物質(zhì)的制備與保管
?、?多管發(fā)酵法所運用的培育液在分裝于各發(fā)酵管中后，應(yīng)將發(fā)酵管趕快放于高壓蒸汽滅菌器中，在115℃滅菌20min(注重：這個溫度也應(yīng)操控好，既到達滅菌的效果，還要避免培育物質(zhì)分化丟失)，然后儲存于冰箱或暗處備用。
⑵.濾膜法所選用的M-FC培育基多運用外購的制品，培育基中苯胺藍的純度和質(zhì)量往往影響菌落的色彩，因而，無菌包裝的成套培育基在運用前，*先接種典型糞大腸菌，以調(diào)查比照菌落的色彩，來判定其穩(wěn)定性。
5．成果核算
⑴.多管發(fā)酵法的成果是依據(jù)不一樣接種量的發(fā)酵管所呈現(xiàn)陽性成果的數(shù)目，從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù)，來核算每升水中糞大腸菌群細菌的MPN值。MPN是“MostProbableNumber"的縮寫，指最大能夠數(shù)，它是依據(jù)核算學(xué)理論，估量水體中的菌群密度和清潔質(zhì)量的一種辦法，所以精確判別不一樣接種量發(fā)酵管的陽性數(shù)是非常重要的，不然將招致較大差錯。
?、?濾膜法的成果是計數(shù)濾膜上呈藍或藍綠色的菌落，來核算出每升水樣中的糞大腸菌群數(shù)。所認為便于計數(shù)，削減差錯，抱負的水樣體積是一片濾膜上成長20-60個糞大腸菌群菌落。
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