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產品簡介

產品簡介：

線粒體提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細胞的線粒體的制備。其制備物產量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。

操作步驟：

1. 樣本處理 a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨組織20次； b. 培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800g離心5~10 min收集細胞，計數(shù)。每次提取需要5×10⁷個細胞，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞，將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內，0℃冰浴研磨30~40次。

2. 將組織或細胞勻漿物轉移到離心管，4℃，1000g 離心5 min。

3. 取上清，轉移至新的離心管中，4℃，1000g再次離心5 min。

4. 取上清，轉移至新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉移到新離心管，線粒體沉淀在管底。

5. 往線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀，4℃，1000 g 離心5 min。

6. 取上清，轉移至新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心10 min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底。

7. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項：

1. 為保證獲得完整的線粒體，務必做到：第一，全程低溫操作；第二，快速；第三，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞，這是制備線粒體的最關鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng)細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞。

2. 以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據(jù)此精確計算離心速度。3. 進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。 轉速與離心力換算：     G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]^２ G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示； [rpm]^２即：轉速的平方； R為半徑，單位為厘米。

備注：以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻, Solarbio暫未進行獨立驗證, 僅供參考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

公司簡介

上海索萊寶生物科技有限公司是一家集銷售生化試劑、實驗耗材、自產分子生物學產品為一體，并能提供的專業(yè)性生物科技公司。公司秉承“以客戶為中心，以產品為保障、以誠信為基礎、以創(chuàng)新為宗旨"的發(fā)展理念，在依靠客戶的大力支持和員工的不懈努力下獲得了快速的成長。公司織結構清晰，內部管理科學，擁有一支既分工細致又高度合作的年輕化隊伍，保持了各個部門之間的高效合作運轉，充分保障了公司在充滿競爭的市場中處于地位。公司注重與*合作，目前已與 Amersham、Amresco、Axygen、BD、Corning、Dragon、Eppendorf等企業(yè)結成緊密的合作伙伴關系，代理其世界的*產品，并在全國各地設有分銷機構。我們將以高度的責任感和出色的產品質量為客戶提供高品質的產品和實驗技術解決方案。豐富的經驗、優(yōu)良的品質、充足的庫存、準確的交貨時間、競爭力的價格，所有這些都保證了我們向您提供的是專業(yè)的服務！立足北京，上海，*，隨著產品營銷戰(zhàn)略的不斷延伸，我們將逐步發(fā)展成為*的專業(yè)性生物科技公司。我們希望能夠和尊敬的客戶一起，利用各自的資源優(yōu)勢和勇于進取的敬業(yè)精神，為中國生命科學研究的發(fā)展作出更多的貢獻。為了更好、更全面的發(fā)展，現(xiàn)公司正在誠招各地代商和招聘若干銷售、研發(fā)人員，歡迎垂詢并期待您的加入！

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