四用紫外分析儀中幾種主要光源作用,利用我們公司的暗箱式紫外分析儀舉例來(lái)講。
有三組光源,白光光源一組,紫外光源兩組分別是365nm和254nm。
首先是白光光源,通常作為系統(tǒng)照明光源使用,即放置或調(diào)整DNA膠或蛋白膠位置,或在對(duì)鏡頭調(diào)整聚焦時(shí)使用,當(dāng)然在對(duì)非透明材質(zhì)的蛋白膠或其他成像物質(zhì)進(jìn)行成像時(shí)也需開啟反射白光。
二個(gè)是:254nm這是一個(gè)比較常用的檢測(cè)波長(zhǎng),大多數(shù)含有苯環(huán)的有機(jī)化合物在此有吸收,不過(guò)這樣它的特征性就不強(qiáng)了!而且會(huì)引來(lái)很多干擾,所以還是建議對(duì)不同物質(zhì)選擇不同的檢測(cè)波長(zhǎng),一是提高靈敏度和選擇性,二是減少不必要的干擾。無(wú)色的成分在245-365nm的紫外燈下檢視可以看到在這個(gè)范圍內(nèi)存在光吸收的成分所發(fā)出的熒光。
三個(gè):365nm光源主要適用于制備觀察以及切割條帶,減少對(duì)DNA的破壞,并減小對(duì)人的傷害。
紫外反射燈源,使用并不廣泛,只是在非透明材質(zhì)的DNA跑膠載體如紙層析等的成像才需要使用。往往比較常用的還是透明的瓊脂糖凝膠與聚丙烯酰胺凝膠,透射光源*可以滿足。
還有一個(gè)不常用的302nm波長(zhǎng),主要用于DNA膠拍攝,由于DNA常用的熒光染料是EB(即Ethidiumbromide,溴化乙錠),而用標(biāo)準(zhǔn)302nm紫外光透射儀激發(fā)并放射出橙紅色信號(hào),可用拍攝到。