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公司動態(tài)
大鼠場景恐懼實驗方法
點擊次數(shù)：3346 發(fā)布時間：2011-7-4
場景恐懼（cued and contextual fear conditioning）是基于巴普洛夫條件反射而建立的。它測定動物學(xué)習(xí)、記憶不悅經(jīng)歷（aversive experience）和環(huán)境暗示之間關(guān)聯(lián)的能力。常用聲音或光暗示作為條件刺激（conditioning stimulus，CS），以厭惡性刺激（如足電擊）作為非條件刺激（unconditioned stimulus，US），二者配對出現(xiàn)。經(jīng)過這種CS-US訓(xùn)練，動物不僅學(xué)會聲音和電擊之間存在，而且知道電擊和周圍環(huán)境之間也存在某種（context）。前者為聽覺暗示條件恐懼（auditory cue fear conditioning）或暗示條件恐懼（cued fear conditioning），后者為關(guān)聯(lián)條件恐懼（contextual fear conditioning）?？謶质欠庆`長類動物少有的幾種情感反應(yīng)之一。動物經(jīng)歷條件恐懼后，當(dāng)再次接觸條件刺激時，會產(chǎn)生一系列的生理反應(yīng)，包括自主神經(jīng)緊張、應(yīng)激激素分泌增加以及防御行為增多，等等。凝滯（freezing）即是動物防御行為的一種，是指動物除呼吸之外沒有任何其他活動，猶如在黑夜處于迎面而來的汽車強(qiáng)燈照射之下的驚鹿，一動不動。它被認(rèn)為是評價嚙齒類動物恐懼的可靠指標(biāo)。
一、實驗設(shè)備
包括條件恐懼箱、隔音箱和關(guān)聯(lián)條件箱，由上海欣軟信息科技有限公司研發(fā)制作。條件恐懼箱包括與箱底格柵地板相聯(lián)的電擊發(fā)生器（可產(chǎn)生0.1~1.0mA的各種強(qiáng)度的電擊）、聲音發(fā)生器（可產(chǎn)生寬頻的卡嗒聲或低頻音），并與計算機(jī)相聯(lián)。隔音箱裝有一燈、一小風(fēng)扇（用于通風(fēng)和產(chǎn)生背景音）以及一個與聲音發(fā)生器相聯(lián)的擴(kuò)音器。隔音箱門上有一貓眼，用于觀察操作箱內(nèi)的動物。一個隔音箱內(nèi)可放置兩個操作箱，這樣可同時觀測兩只動物，但兩動物彼此不能互相看見。關(guān)聯(lián)箱由透明有機(jī)玻璃制成，有可移動的格柵式地板和紗窗式頂部。為防止動物滑至格柵下面，格柵條之間距離應(yīng)足夠短。對小鼠和年幼大鼠，關(guān)聯(lián)條件箱通常為26cm*21cm*10cm；格柵地板由不銹鋼條（直徑1.5mm，中央間距小鼠為0.5cm、年幼大鼠為1.2cm）組成。對成年大鼠，關(guān)聯(lián)箱通常為29cm*23.5cm*19.5cm，格柵地板包括16根不銹鋼條（直徑2.5cm、中央間距為1.25cm）。此外，還有電壓計和聲強(qiáng)計，用來檢測刺激強(qiáng)度。
- 二、實驗方法
分為訓(xùn)練和測試兩階段
（一）訓(xùn)練階段（*天）
1．調(diào)試儀器，以確保格柵地板有電流刺激，擴(kuò)音器有聲音刺激，并分別記錄電流強(qiáng)度和聲音強(qiáng)度（分貝）。
2．將大鼠放入條件恐懼箱2min（A相），記錄這zui初2min內(nèi)動物的凝滯（freezing）時間作基線。
3．接著加入卡嗒聲，80Db,30s（B相）。
4．緊接著再給予電擊，0.35mA，2s（C相），完成一輪訓(xùn)練。如需要多輪訓(xùn)練，則重復(fù)A、B、C三相訓(xùn)練即可。
5．記錄整個訓(xùn)練階段動物凝滯時間（s），用以測量動物的非條件恐懼（unconditioned fear）。
6．將大鼠移開操作箱。用70%的酒精或4%醋酸溶液*清潔操作箱，以備進(jìn)行下一批動物的訓(xùn)練。
（二）測試階段
1．關(guān)聯(lián)測試
2．變更關(guān)聯(lián)測試和聽覺條件刺激測試
（1）將計算機(jī)調(diào)至所需程序。
（2）操作箱進(jìn)行如下改造：1用平滑塑料板取代關(guān)聯(lián)條件箱內(nèi)的格柵地板；2在箱的對角線加一塊有色塑料板，這樣將長方體的操作箱變成三角體；3改變嗅覺暗示（olfactory cues）。例如，可在箱的一角放一個裝有一滴桔子汁或檸檬汁的杯子，或直接將一滴果汁涂于墻上。然后開始變更關(guān)聯(lián)和聽覺條件刺激實驗。
（3）將動物放入經(jīng)改造后的關(guān)聯(lián)箱（從關(guān)聯(lián)實驗中的*只動物開始）。
（4）啟動預(yù)置的實驗程序，每隔10秒記錄動物的凝滯和非凝滯得分（分別為1和0分），共記錄3min，即18次可能的凝滯記錄（凝滯得分為18）。
（5）加入聽覺條件刺激30秒。重復(fù)上述記錄3分鐘。
（6）將動物放回籠子，清潔操作箱，進(jìn)行下一只動物的測試。
- 三、結(jié)果計算與分析
因為不同類型的學(xué)習(xí)凝滯時間不同，所以zui常使用百分計：
關(guān)聯(lián)=（關(guān)聯(lián)測試中的凝滯得分/30）*100%
變更關(guān)聯(lián)（條件刺激前）=（變更關(guān)聯(lián)中的凝滯得分/18）*100%
聽覺暗示（條件刺激）=（聽覺條件刺激中凝滯得分/18）*100%
對每一不同的凝滯測試計分進(jìn)行重復(fù)測量單因素方差分析（ANOVA），從此比較關(guān)聯(lián)和變更關(guān)聯(lián)或聽覺暗示之間的條件恐懼程度，并確定組間差異。一般而言，動物在聽覺暗示中的凝滯行為要比關(guān)聯(lián)測試的多。在變更關(guān)聯(lián)測試中，由于關(guān)聯(lián)條件箱已被改造得“面目全非”，訓(xùn)練時動物獲得的對周圍環(huán)境的關(guān)聯(lián)幾乎不存在，因此，凝滯行為應(yīng)該zui少。關(guān)聯(lián)與變更關(guān)聯(lián)差別很大，凝滯計分差別越大。