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抗體保存指南
點(diǎn)擊次數(shù)：1800 發(fā)布時(shí)間：2021-4-22
如何正確保存抗體產(chǎn)品？為什么有的產(chǎn)品要保存在-20°，有的卻要放在4°冰箱？不同類型抗體儲(chǔ)存時(shí)候是否有差異？本篇將重點(diǎn)為大家解答，請(qǐng)保存好這份abcam抗體保存指南，以便于以后查詢。
一、保存溫度
對(duì)于我們的許多抗體而言，分裝為小等份（推薦每份體積為 10 μL）在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下凍存是最佳的保存條件。分裝抗體可以最大限度減少凍融對(duì)抗體造成的損壞，還可避免多次從同一管中移取抗體而引入污染。分裝后抗體只可凍融一次，如有剩余，應(yīng)保存在 4 ℃ 下。
收到抗體后，請(qǐng)以 10,000 × g 離心 20 秒，沉降滯留在管蓋螺紋中的溶液，然后分裝抗體并將其轉(zhuǎn)移至低蛋白質(zhì)結(jié)合的微量離心管中。分裝抗體的量取決于您在實(shí)驗(yàn)中常用的量。分裝抗體應(yīng)不少于 10 μL；分裝抗體量越少，濃度就越容易受到蒸發(fā)以及儲(chǔ)存樣品管表面吸附的影響。
在大部分情況下，可在收到抗體之后立即將其保存于 4 ℃ 下，可保存 1 至 2 周。具體產(chǎn)品還請(qǐng)遵循數(shù)據(jù)表上的保存建議，這一點(diǎn)非常重要
二、特例
切勿凍存酶偶聯(lián)的抗體，而應(yīng)將其保存在 4 ℃ 下。凍融不僅會(huì)影響抗體的結(jié)合能力，還會(huì)降低酶活性。
偶聯(lián)抗體（無(wú)論是偶聯(lián)有熒光染料、酶還是生物素）應(yīng)保存在深色樣品瓶中或用錫箔紙包裹樣品瓶。暴露于光下會(huì)影響偶聯(lián)物的活性。熒光偶聯(lián)物尤其容易發(fā)生光致漂白，因此在實(shí)驗(yàn)各階段都應(yīng)避光保存。
三、污染- 為了防止微生物污染，可將疊氮化na加入抗體制備物中，疊氮化na的最終濃度為 0.02% (w/v)。我們的多款抗體中都含有這種保護(hù)劑，其濃度范圍為 0.02%-0.05%。每個(gè)抗體產(chǎn)品數(shù)據(jù)表的保存緩沖液部分將對(duì)此進(jìn)行說(shuō)明。
IgG3 同型抗體的*之處在于其解凍后容易形成聚集體，因此應(yīng)始終保存在 4 ℃ 下。
腹水液中可能含有蛋白酶，因此收到后應(yīng)盡快凍存。
四、不使用疊氮化na的情況
如果要用抗體對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色或處理，或者要用抗體進(jìn)行體內(nèi)研究，請(qǐng)務(wù)必使用不含疊氮化na的制備物。這種抗菌劑對(duì)大部分生物體都有毒害作用：它會(huì)阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)。
疊氮化na會(huì)干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng)，因此必須在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之前將其去除。完成偶聯(lián)反應(yīng)之后，可使用疊氮化na保存抗體。另一種可用的抗菌劑是 0.01% 硫柳汞na（硫柳汞），這種物質(zhì)不含伯胺。
抗體溶液中的疊氮化na可通過(guò)滲析或凝膠過(guò)濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da（IgM 約為 600,000 Da），疊氮化na的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微滲析裝置可使疊氮化物順利擴(kuò)散出去，而抗體得以保留。
滲析過(guò)程在燒杯中（置于磁力攪拌器上，溫度保持 4 ℃）進(jìn)行，每毫升抗體使用至少 1 升預(yù)冷的 PBS，攪拌滲析裝置 6 小時(shí)。更換 PBS 兩次，每次更換后均攪拌至少 6 小時(shí)。如有可能，所有材料都應(yīng)滅菌，并且應(yīng)在無(wú)菌條件下處理所得制備物。
五、凍融損壞
反復(fù)凍融可能使抗體變性，導(dǎo)致抗體形成聚集體，從而降低其結(jié)合能力。所以抗體產(chǎn)品務(wù)必要避免反復(fù)凍融。
對(duì)大部分抗體而言，在 -20 ℃ 下保存就已足夠；在 -80 ℃ 下保存并無(wú)明顯優(yōu)勢(shì)。應(yīng)避免使用無(wú)霜冰箱，因?yàn)榇祟惐涞膬鋈谘h(huán)（用于減少霜的形成）正是保存此類抗體需要避免的。出于相同的原因，應(yīng)將抗體樣品瓶放在冰箱中溫度波動(dòng)最小的區(qū)域，例如抵靠冰箱背板放置而不是置于冰箱門架上。
有些研究人員向抗體中加入冷凍保護(hù)劑甘油（最終濃度為 50%）以防止凍融損壞；甘油可將冷凝點(diǎn)降至 -20 ℃ 以下。雖然這種方法可用于多種抗體，但我們僅對(duì)少數(shù)幾種 Abcam 抗體在這種保存條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行了測(cè)試，我們僅擔(dān)保遵循數(shù)據(jù)表建議進(jìn)行保存的抗體的性能。我們不建議在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液，因?yàn)樵摐囟鹊陀诟视偷睦淠c(diǎn)。請(qǐng)注意，甘油可能會(huì)被細(xì)菌污染。如果加入了甘油或任何冷凍保護(hù)劑，應(yīng)當(dāng)小心操作，確保獲得無(wú)菌制備物。
六、蛋白質(zhì)和穩(wěn)定劑
- 將抗體稀釋至工作濃度后，在 4 ℃ 下保存不得超過(guò)一天。一般而言，以高濃度保存的蛋白質(zhì)更不易降解，理想濃度是 1 mg/mL 或更高。這就是將蛋白質(zhì)（如 BSA）作為穩(wěn)定劑加入抗體溶液的基本原理。加入的蛋白質(zhì)還能盡可能減少抗體結(jié)合到容器壁上造成的損失。請(qǐng)勿向?qū)⒁M(jìn)行偶聯(lián)的抗體中加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)穩(wěn)定劑會(huì)與抗體競(jìng)爭(zhēng)，降低偶聯(lián)效率。