奇昆古尼亞病毒流行，1956年分離到病毒。本病主要流行于非洲和東南亞地區(qū)，近年在印度洋地區(qū)造成了大規(guī)模流行。該病臨床癥狀與登革熱類似，容易誤診。雖然病死率很低，但在蚊媒密度較高地區(qū)易形成大規(guī)模暴發(fā)和流行。近期檢疫部門又在赴斯里蘭卡務(wù)工回國人員中檢出輸入性病例。使用奇昆古尼亞病毒IgM抗體檢測試劑盒助力疾病傳播。

奇昆古尼亞病毒IgM抗體檢測試劑盒

奇昆古尼亞病毒流行，1956年分離到病毒。本病主要流行于非洲和東南亞地區(qū)，近年在印度洋地區(qū)造成了大規(guī)模流行。該病臨床癥狀與登革熱類似，容易誤診。雖然病死率很低，但在蚊媒密度較高地區(qū)易形成大規(guī)模暴發(fā)和流行。

中國曾于80年代報道在云南人群中發(fā)現(xiàn)存在奇昆古尼亞病毒感染，近期檢疫部門又在赴斯里蘭卡務(wù)工回國人員中檢出輸入性病例。為指導(dǎo)臨床醫(yī)生和傳染病預(yù)防控制專業(yè)人員做好基孔肯雅熱輸入疫情的防控，做好蚊媒密度監(jiān)測和控制，有效防范和處置疾病的本地傳播和流行，使用奇昆古尼亞病毒IgM抗體檢測試劑盒。

奇昆古尼亞病毒IgM抗體檢測試劑盒 說明書

【預(yù)期用途】

奇昆古尼亞病毒IgM抗體檢測試劑盒主要用于定性檢測人血清和血漿中抗基孔肯雅病毒的IgG抗體。

【實(shí)驗(yàn)原理】

      奇昆古尼亞病毒IgM抗體檢測試劑盒基于ELISA技術(shù)。包被板中包被了抗人IgM抗體，如果人血清或血漿中含有IgM時，則會與其特異性結(jié)合，洗板將未結(jié)合的物質(zhì)洗去， 然后加入基孔肯雅抗原溶液，洗板洗去未結(jié)合的物質(zhì)，然后加入鏈霉親和素和基孔肯雅抗體酶聯(lián)物。洗板后，加入TMB底物液，顏色變成藍(lán)色，加入終止液終止反 應(yīng)，顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色，后用酶標(biāo)儀在450nm處讀數(shù)。

【試劑組成】

包被板：12×8可拆卸，包被了抗人IgM抗體，密封在可重封鋁箔袋中

基孔肯雅溶液1：1瓶包含6mL的基孔肯雅抗原溶液，即用，白蓋

基孔肯雅溶液2：1瓶包含6mL的生物素化的基孔肯雅抗體，即用，藍(lán)色，白蓋

基孔肯雅IgM陽性質(zhì)控：1瓶，1.5mL，黃色，即用，紅蓋

基孔肯雅IgM臨界質(zhì)控：1瓶， 2mL，黃色，即用，綠蓋

基孔肯雅IgM陰性質(zhì)控：1瓶，1.5mL，黃色，即用，藍(lán)蓋

樣本稀釋液： 1瓶包含100mL的即用緩沖液，用于稀釋樣本，pH7.2±0.2，黃色，白蓋

洗滌液：1瓶，包含50mL  20倍濃縮的緩沖液，（pH7.2±0.2）用于洗板，白蓋

鏈霉親和素結(jié)合液：1瓶包含6mL過氧化物酶結(jié)合的鏈霉親和素，即用，紅色，黑蓋

TMB底物液：1瓶包含15mL  TMB，即用，黃蓋

終止液：1瓶包含15mL，即用，內(nèi)含硫酸，0.2mol/l，紅蓋

【需要的設(shè)備和材料】

             固定板

             封板片

             酶標(biāo)儀（450/620nm）

             37℃孵箱

             洗瓶或自動洗板機(jī)

             10~1000μL的移液器

             漩渦混勻器

             蒸餾水或去離子水

             一次性試管

             計時器

【儲存和穩(wěn)定性】

試劑在有效期內(nèi)，儲存于2-8℃穩(wěn)定

【試劑準(zhǔn)備】

洗滌液的準(zhǔn)備

用雙蒸水稀釋洗滌液，例子：10ml洗滌液+190ml雙蒸水。稀釋好的洗滌液在室溫下5天內(nèi)有效。

【樣本的采集和準(zhǔn)備】

這個實(shí)驗(yàn)中使用的樣本是人血清和血漿，如果實(shí)驗(yàn)在樣本采集后的5天內(nèi)進(jìn)行，則需要儲存在2-8℃，否則，必須于-20℃到-70℃深度凍存。如果樣本是深度凍存的，在使用前，則需要充分混勻，避免反復(fù)凍融。

不推薦使用熱滅活的樣本

【樣本的稀釋】

將10μL樣本跟1ml的樣本稀釋液混勻，并用漩渦混勻器充分混勻。

【實(shí)驗(yàn)步驟】

在開始試驗(yàn)前，請仔細(xì)閱讀試驗(yàn)說明。結(jié)果的可信度是依賴于嚴(yán)格地按照實(shí)驗(yàn)說明來進(jìn)行的，鋪板時少留1個孔為空白對照（A1）1個陰性質(zhì)控孔（B1）2個臨界質(zhì)控孔（C1+D1）1個陽性質(zhì)控孔（E1）。開始試驗(yàn)前，請將所有試劑都平衡到室溫

1.         吸取50μL的質(zhì)控品和稀釋過的樣本到相應(yīng)的孔中，留A1孔做空白對照孔

2.         封板

3.         在37±1℃下孵育1小時±5分鐘

4.         當(dāng)孵育完成時，揭去封板片，棄去反應(yīng)液，每孔300μL洗滌液，洗板3次，避免溢出。每孔浸泡的時間都必須＞5秒，后拍板將殘留的液滴都拍去。

5.         吸取50μL奇昆古尼亞溶液1到除了空白對照孔的每個孔中，蓋板

6.         在室溫孵育30分鐘

7.         重復(fù)步驟4

8.         將奇昆古尼亞液2跟鏈霉親和素結(jié)合物混勻10分鐘

9.         吸取50μL奇昆古尼亞溶液2跟鏈霉親和素的復(fù)合物到除了空白對照孔的每個孔中，蓋板。

10.     室溫孵育30分鐘

11.     重復(fù)步驟4

12.     吸取100μL  TMB底物液到每個孔中

13.     避光孵育15分鐘（精確）

14.     加入100μL終止液到每個孔中，與加TMB底物液時的間隔和順序都必須一樣

15.     用酶標(biāo)儀在加入終止液后30分鐘內(nèi)與450/620nm處檢測

【檢測】

調(diào)整酶標(biāo)儀，以空白對照孔調(diào)零，以450nm處檢測所有孔的吸光度值。

【結(jié)果】

1.         檢測生效的條件
 

只有以下條件符合，檢測的結(jié)果才能認(rèn)為的有效的

 空白對照孔             吸光度值＜0.100

 陰性質(zhì)控孔             吸光度值＜臨界質(zhì)控

 臨界質(zhì)控孔             吸光度值0.150-1.300

 陽性質(zhì)控孔             吸光度值＞臨界質(zhì)控

如果以上條件不符合的，那么試驗(yàn)結(jié)果則是無效的，需要重新檢測

2.         結(jié)果的計算

臨界質(zhì)控平均吸光度值的計算，例子：吸光度1：0.39；吸光度2：0.37

                                  （0.39+0.37）/2=0.38

                                 平均吸光度值為0.38

3.         結(jié)果的說明

樣本如果是比臨界值高出10%，則認(rèn)定為陽性，

樣本如果是在臨界值上下10%之內(nèi)，則認(rèn)定為灰色區(qū)（推薦在2-4周之后再次檢測新鮮的樣本，如果樣本仍然是灰色區(qū)，可以直接認(rèn)為是陰性）

樣本如果是比臨界值低出10%，則認(rèn)定為陰性

4.         結(jié)果的單位

病人樣本平均吸光度值×10     = U

   臨界值

例子： 1.216×10    =32U

0.38

臨界值： 10   U

灰色區(qū)：9-11   U

陰性：   ＜9   U

陽性：   ＞11  U

奇昆古尼亞病毒IgM抗體檢測試劑盒能快速檢測人體血清中奇昆古尼亞病毒IgM抗體。

奇昆古尼亞病毒IgM抗體檢測試劑 ELISA法  96次/盒

奇昆古尼亞病毒IgＧ抗體 ELISA法  96次/盒

奇昆古尼亞病毒IgG/IgM抗體  膠體金法   25次/盒

溫馨提示：不可用于臨床治療。

奇昆古尼亞病毒IgM抗體檢測試劑盒

經(jīng)銷商：廣州市宜康生物科技有限公司