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【CEM】寵物食品中?；撬岷康目焖僦苽?/h2>
檢測樣品：寵物食品
檢測項目：?；撬?/b>
方案概述：DiscoverPrep微波反應(yīng)系統(tǒng)成功水解了寵物食品中的氨基酸，并產(chǎn)生了與傳統(tǒng)烘箱水解相似的結(jié)果。在比較氨基酸含量時，傳統(tǒng)烘箱水解和Discover水解的結(jié)果%RSD均小于10%。在比較狗糧的?；撬岷繒r，樣品1的含量最高，其次是樣品2和樣品3。
檢測樣品：寵物食品
檢測項目：?；撬?/b>
方案概述：DiscoverPrep微波反應(yīng)系統(tǒng)成功水解了寵物食品中的氨基酸，并產(chǎn)生了與傳統(tǒng)烘箱水解相似的結(jié)果。在比較氨基酸含量時，傳統(tǒng)烘箱水解和Discover水解的結(jié)果%RSD均小于10%。在比較狗糧的?；撬岷繒r，樣品1的含量最高，其次是樣品2和樣品3。
一、引言
寵物通常被視為我們直系家庭中毛茸茸的（有鱗、有羽毛等）成員，在現(xiàn)代生活中扮演著重要角色。寵物用品從加熱床到專業(yè)美容服務(wù)應(yīng)有盡侑，因此它們的飲食受到更嚴格的審查也就不足為奇了。狗糧形式多樣，不同食譜對健康有益也有風(fēng)險。近來，無谷物或富含豆類的飲食因其與犬類心臟病——擴張型心肌?。?/span>DM）之間的聯(lián)系而受到質(zhì)疑，這種疾病可導(dǎo)致充血性心力衰竭，最終可能導(dǎo)致死亡。DM是由于缺乏?；撬嵋鸬?，因此狗的飲食必須含有足量的牛磺酸。
在本研究中，使用Discover Prep™系統(tǒng)水解狗糧樣本，以將氨基酸從其結(jié)合的蛋白質(zhì)中釋放出來。與傳統(tǒng)的水解技術(shù)相比，Discover Prep利用微波進行樣本水解，將技術(shù)的時間框架從24小時縮短至不到一小時。水解后，樣本被中和，并使用Waters AccQ-Tag®試劑盒測量氨基酸含量。結(jié)果表明，與傳統(tǒng)方法相比，Discover Prep能夠迅速且準確地從寵物食品中的蛋白質(zhì)水解出?；撬?，具有很好的精確度。無谷物狗糧和含谷物狗糧樣本的?；撬岷窟M行了比較。對于實驗室量化狗糧中的?；撬岷推渌被岫?，Discover Prep是一個理想的選擇。
二、材料與方法
試劑和樣品
所有試劑均購自商業(yè)供應(yīng)商。所有狗糧樣品均從當(dāng)?shù)貙櫸镉闷返曩徺I。所有狗糧樣品均使用商用廚房攪拌機研磨。選擇這些狗糧是因為它們的主要蛋白質(zhì)成分不同，并且標稱含有高含量的?；撬帷７治隽巳齻€樣品：樣品1是三文魚、紅薯和南瓜配方，樣品2是雞肉和紅薯配方，樣品3是火雞和燕麥配方。水解溶液在使用前新鮮制備。
狗糧樣品使用CEM Discover Prep系統(tǒng)進行水解。通過柱前衍生化測定水解產(chǎn)物的氨基酸含量，然后通過UPLC®注射和在260 nm下的PDA檢測進行分析。使用Waters AccQ-Tag Ultra衍生化試劑盒對水解產(chǎn)物進行LC-PDA分析。Discover Prep樣品制備的結(jié)果與傳統(tǒng)烤箱法及營養(yǎng)標簽進行了比較。
Discover Prep樣品制備
將100毫克狗糧樣品加入裝有攪拌棒的35 mL Discover Pyrex®小瓶中。記錄質(zhì)量以供分析。對于酸性水解，向每個小瓶中加入5毫升含1%苯酚的6 N HCl。所有小瓶用N2吹掃1分鐘，然后迅速蓋上蓋子。樣品按以下Discover Prep方法運行：
酸性水解
小瓶類型：Pyrex
控制類型：動態(tài)
溫度：160 °C
時間：30分鐘
壓力：300 PSI
功率：300 W
攪拌：高
傳統(tǒng)水解樣品制備
將40毫克狗糧樣品加入適當(dāng)?shù)牟Ａ∑恐?。記錄質(zhì)量以供分析。對于酸性水解，向每個小瓶中加入2毫升含1%苯酚的6 N HCl。所有小瓶用N2吹掃1分鐘，然后迅速蓋上蓋子。然后將小瓶放入設(shè)定為110 °C的空氣烘箱中24小時。
水解后樣品制備和衍生化分析
酸性水解樣品用6 N NaOH中和，并用0.26 µm PTFE注射器過濾器過濾。中和后，樣品用Waters AccQ-Tag試劑盒進行衍生化。向一個完整的回收小瓶中加入80 µL來自Waters AccQ-Tag Ultra衍生化試劑盒的硼酸緩沖液。然后，加入10 µL樣品并蓋緊蓋子渦旋。接著，向每個樣品反應(yīng)中加入10 µL準備好的衍生化試劑。最后，將反應(yīng)渦旋10秒鐘，然后在55 °C下加熱10分鐘進行分析。
分析
每個衍生化反應(yīng)取1 μL樣品注入Waters AccQ-Tag Ultra C18柱（1.7 μm, 2.1 x 100 mm），該柱連接到帶有Waters PDA檢測器的Waters ACQUITY™ H-Class UPLC®。流速設(shè)定為0.4 mL/min。柱溫保持在55 °C，吸收波長監(jiān)測在260 nm。用于分離的洗脫梯度如表1所示。流動相為A: Milli-Q®水中稀釋10倍的Waters AccQ-Tag洗脫液A和B: Waters AccQ-Tag洗脫液B。為了每種氨基酸創(chuàng)建校準曲線，使用Waters Amino Acid Food and Feed Standard Kit（Waters Corporation, SKU. 186009299）進行衍生化，濃度分別為1, 5, 10, 25, 和50 pmol/μL。采用線性回歸法分析樣品。
表1. 衍生化氨基酸分離所用梯度
三、結(jié)果
圖1. Discover Prep水解中回收的?；撬崃?/span>
圖2. 從狗糧中回收的氨基酸量
四、結(jié)論
Discover Prep微波反應(yīng)系統(tǒng)成功水解了寵物食品中的氨基酸，并產(chǎn)生了與傳統(tǒng)烘箱水解相似的結(jié)果。在比較氨基酸含量時，傳統(tǒng)烘箱水解和Discover水解的結(jié)果%RSD均小于10%。在比較狗糧的牛磺酸含量時，樣品1的含量最高，其次是樣品2和樣品3。
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