中文名稱：小鼠脂肪細(xì)胞

英文名稱：3T3 L1

產(chǎn)品規(guī)格：25cm2
 

本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！
 
一、組成
 
細(xì)胞一瓶 25cm2
細(xì)胞說明書 1份
細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng) 1份
 
二、客戶自備試劑
1、PBS 
2、RPMI-1640培養(yǎng)基+ 10%小牛血清
3、0.25% （W/V）胰蛋白酶（含0.53mM EDTA）
 
三、細(xì)胞背景
1、生長方式：貼壁
2、種屬：Mus musculus （mouse）
3、形態(tài)學(xué)：成纖維細(xì)胞樣
4、組織來源：胚胎
5、其他：L1是通過克隆分離得到的3T3 （swiss小白鼠）的連續(xù)亞株。 當(dāng)細(xì)胞從快速分裂到長滿且接觸
抑制時(shí)，該細(xì)胞經(jīng)過前脂肪向脂肪樣逆轉(zhuǎn)。 培液中，高血清含量可以促進(jìn)脂肪積累 
 
四、培養(yǎng)條件
1、培養(yǎng)基：DMEM（高糖）+10%CS
2、溫度：37.0°C
3、氣體:空氣 95%，CO2 5%
4、培養(yǎng)條件：細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)在塑料材質(zhì)的器皿中，在玻璃材質(zhì)的器皿中可能生長的不是很好。每平方厘米
細(xì)胞數(shù)目能達(dá)到50000個(gè)。
 
五、培養(yǎng)方法
  不能允許細(xì)胞*匯合
1、吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)液。
2、用0.25% （w/v）胰蛋白酶和EDTA混合液漂洗細(xì)胞層，除去培養(yǎng)基殘液，避免對胰蛋白酶的抑制。
3、向瓶內(nèi)加入2.0-3.0ml胰蛋白酶液和EDTA混合液（以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜），在倒置顯微鏡下觀察細(xì)
胞，直到細(xì)胞層分散。（注：為了避免細(xì)胞聚集，在細(xì)胞分散的過程中，不要晃動(dòng)細(xì)胞。消化難度較大的
細(xì)胞，應(yīng)放于37°C溫浴。）
4、加入6.0-8.0ml的培養(yǎng)基，混均細(xì)胞。
5、用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中（注：*接種濃度為2-3 X 10（3）細(xì)胞/平方厘米，達(dá)到
70%-80%匯合或細(xì)胞數(shù)達(dá)到5-6 X10（4）細(xì)胞/平方厘米傳代）
6、置CO2培養(yǎng)箱中，在37°C進(jìn)行培養(yǎng)。
7、培養(yǎng)基更新：每周2-3次
 
六、保存方式
1、保存培養(yǎng)基：培養(yǎng)基95%，DMSO, 5%
2、保存條件：液氮
  

 
FOR LABORATORY RESEARCH USE ONLY. NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS!PLEASE
READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
 
一、REAGENTS PROVIDED
Cell 25cm2
Instruction   1
Cell culture advice 1
二、 MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
1、PBS  
   2、Complete growth medium
   3、0.25% Trypsin-0.53mM EDTA
 
三、CELL BACKGROUND
1、Growth Properties: Adherent
2、Organism: Mus musculus （mouse）
3、Morphology: fibroblast  
4、Source: Organ: embryo  
6、Comments: L1 is a continuous substrain of 3T3 （Swiss albino） developed through clonal isolation. The cells
undergo a pre-adipose to adipose like conversion as they progress from a rapidly dividing to a confluent and
contact  inhibited  state.  A  high  serum  content  in  the  medium  enhances  fat  accumulation  [PubMed  ID:
4426090]. Tested and found negative for ectromelia virus （mousepox）.
 
四、PROPAGATION
        1、Complete growth medium: DMEM（高糖）+10%CS
        2、Temperature: 37.0C
3、Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide （CO2）, 5%
4、Growth Conditions: The cells should be grown in plastic flasks, they do not grow well on some types of
glass surfaces. A saturation density of approximay 50000 cells per sq cm can be reached.
 
五、SUBCULTURING PROTOCOL
     Never allow culture to become compley confluent.  
1.       Remove and discard culture medium.  
2.       Briefly rinse the cell layer with 0.25% （w/v） Trypsin - 0.53 mM EDTA solution to remove all traces of
serum that contains trypsin inhibitor.  
3.       Add 2.0 to 3.0 ml of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope
until cell layer is dispersed （usually within 5 to 15 minutes）.
Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells
to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37C to facilitate dispersal.  
4.       Add 6.0 to 8.0 ml of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.  
5.       Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.  
The recommended inoculum is 2 to 3 X 10（3） cells/sq. cm. Subculture before cultures become 70 to 80%
confluent or when cells reach 5 to 6 X10（4） viable cells/sq. cm.  
6.       Incubate cultures at 37C.
Interval: Every three days
Medium renewal: 2 to 3 times per week
 
六、PRESERVATION
Freeze medium: culture medium 95%; DMSO, 5%
Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase
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僅供參考，以隨貨說明書為準(zhǔn).