基本信息

細胞名稱 : HEP-53.4 小鼠肝癌細胞

細胞別名 : HEP-53.4 ; 53.4 ; 小鼠肝癌細胞

細胞來源 : 德國

細胞鑒定 : STR鑒定已通過

細胞形態(tài) : 上皮樣細胞，貼壁生長

培 養(yǎng) 基 : DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)(BasMed-AW-013)+FBS 10% + P/S1%

培養(yǎng)條件 : 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

凍存條件 : 無血清凍存液，液氮儲存

細胞背景 : 來源于 C57BL/6J小鼠的原發(fā)性肝細胞癌，這些小鼠肝細胞忠實地代表了肝細胞癌，并為研究這種類型的肝癌提供了有價值的模型，同義詞HEP-53.4和53.4，它們便于識別和交叉引用，肝細胞癌是一個重大的健康問題，這些細胞能夠對其分子通路、細胞相互作用和治療策略進行精確研究，這些細胞起源于Mus musculus(小鼠)，為理解和開發(fā)肝細胞癌的治療方法提供了相關的模型系統(tǒng)。

細胞用途 : 僅供科研使用

細胞貨期 : 現(xiàn)貨，1周左右

注意事項

1. 常規(guī)消化收集細胞離心。

2. 離心后去掉離心管內上清，加入1ml左右重懸細胞混勻，建議輕輕晃動或者輕輕吹打細胞， 放入培養(yǎng)箱消化細胞，再消化1min左右。

3. 消化好后，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散，迅速加入3-5ml含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化，離心去除

4. 加入5ml左右的細胞相應的培養(yǎng)基混勻，按比例接入培養(yǎng)瓶/皿中。

5. 顯微鏡下觀察看細胞是否成均勻分散的單細胞，若有少量成團的小細胞團可不用重新消化，使之貼壁后待細胞生長穩(wěn)定后再消散細胞。

常溫發(fā)貨

收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-3小時后觀察密度和狀態(tài)拍照2-3張反饋給銷售，密度達標就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成1個1ml凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復凍存2-3只后才擴增做實驗，以防突發(fā)情況引起斷種。

干冰發(fā)貨常規(guī)細胞發(fā)貨凍存管2只，復蘇1只，另外一只備用，第一個復蘇不成功時嚴格按照廠家要求復蘇第二個，均沒有復蘇成功的情況即時留存復蘇照片通知我們。

貼壁細胞

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％(w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化３.３.３.３.3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

4. 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

５. 運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

懸浮細胞

HEP-53.4 小鼠肝癌細胞懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在1×10?~1×10?個/mL(不同細胞對密度要求不同）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:4的比例進行。

運輸形式低溫：1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫: T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

特別注意

該細胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長良好，大部分的DMEM含有較高濃度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞時需要提高CO2濃度（7%-10%）。