細(xì)胞3D打印機(jī)：解凍細(xì)胞

概述

正確解凍細(xì)胞對細(xì)胞培養(yǎng)健康至關(guān)重要。通常，特定的細(xì)胞系將具有制造商提供的特定解凍方案。這是解凍細(xì)胞的一般方案，不附帶制造商的解凍方案。請注意，不遵循制造商的說明可能會導(dǎo)致細(xì)胞死亡或功能不正常。

材料

• 凍存細(xì)胞瓶

• 細(xì)胞培養(yǎng)基

• 組織培養(yǎng)瓶

• 水浴/珠浴 （37°C）

• 70%乙醇

• Kimwipes

• 生物安全柜 （BSC）

• 培養(yǎng)箱（37°C，5% CO2)

• 自動移液器進(jìn)樣器

• 血清移液管

• 微量移液器

• 微量移液器吸頭

方法

1. 在水/珠浴中將細(xì)胞培養(yǎng)基加熱至 37°C;

2. 請記住用 70% 乙醇噴灑所有東西，并在進(jìn)入 BSC 之前用 Kimwipes 擦拭;

3. 檢查冷凍保存小瓶中的細(xì)胞數(shù)量，并用相應(yīng)量的溫細(xì)胞培養(yǎng)基制備適當(dāng)數(shù)量的燒瓶。細(xì)胞接種密度因每種細(xì)胞類型而異，但通常為 2,000-5,000 個細(xì)胞/厘米2.培養(yǎng)基量也因燒瓶大小而異，但建議每厘米使用 0.2 mL 培養(yǎng)基2.在下面找到有用的公式;

• 燒瓶數(shù) = 細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞接種密度/燒瓶面積（厘米）2

• 介質(zhì)量 =（燒瓶面積，單位為厘米2）*0.2 毫升

1. 從液氮中取出細(xì)胞瓶，將其浸入水/珠浴中直至蓋子不超過 2 分鐘;

2. 當(dāng)小瓶的側(cè)面解凍但其中心保持凍結(jié)時取出小瓶;

3. 噴灑所有培養(yǎng)基和移液管，并將它們移入 BSC;

4. 將 1 mL 培養(yǎng)基移液到細(xì)胞瓶中;

5. 上下移液器溶液，確保細(xì)胞分布均勻;

6. 將相應(yīng)量的細(xì)胞溶液移液到每個含有細(xì)胞培養(yǎng)基的燒瓶中。使用以下公式計算每個燒瓶中要添加多少細(xì)胞溶液;

• 接種細(xì)胞溶液量 = 細(xì)胞溶液體積/培養(yǎng)瓶數(shù)

1. 輕輕搖晃燒瓶，不要讓溶液接觸過濾器蓋。如果過濾器與液體接觸，無菌屏障可能會被破壞，并且您可能已將細(xì)胞培養(yǎng)物暴露于外部病原體;

2. 給燒瓶貼上標(biāo)簽。好包括以下信息;

• 您的姓名字母和通過日期（例如：如果您的姓名字母是 YN，日期是 MM/DD/YYYY，請將其標(biāo)記為 YNYYYMMDD）

• 細(xì)胞系和傳代數(shù)（如果您的小瓶是 Pn，它們現(xiàn)在將是 Pn+1）。

1. 將燒瓶放入培養(yǎng)箱中;

2. 按照此協(xié)議，每兩到三天喂養(yǎng)一次細(xì)胞;

3. 遵循此方案的傳代細(xì)胞。

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