AC11L262 EdU細(xì)胞增殖流式檢測試劑盒
| 參考價 | ￥ 1280 |
| 訂貨量 | ≥1 件 |
- 公司名稱 和元李記（上海）生物技術(shù)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 AC11L262
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/8/7 11:04:34
- 訪問次數(shù) 1835
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胎牛血清，轉(zhuǎn)染試劑（高效），凍存液（普通），cck-8，1640培養(yǎng)基，PBS液體，凋亡試劑盒，熒光素鉀鹽，蛋白Mark，發(fā)光液（超敏），快速封閉
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
|---|
EdU細(xì)胞增殖流式檢測試劑盒
產(chǎn)品描述
細(xì)胞增殖是評價細(xì)胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物，其連有的炔烴基團(tuán)在天然化合物中很少見，能夠在細(xì)胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng)，把熒光基團(tuán)標(biāo)記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣可以進(jìn)行高效快速的檢測出DNA復(fù)制活性，此技術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。
傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識別位點，操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，大小卻只有BrdU抗體的1/500，很容易在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散；無需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。
訂購信息
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
| EdU細(xì)胞增殖流式檢測試劑盒 | AC11L262 | 20 T | 1280 |
產(chǎn)品組分
| 產(chǎn)品組分 | 規(guī)格 |
| EdU溶液 | 80 μL |
| 反應(yīng)緩沖液 | 2 mL |
| 催化劑溶液 | 800 μL |
| TAMRA 紅色熒光溶液 | 50 μL |
| 緩沖添加劑 | 400 mg |
| Hoechst 33342 | 40 μL |
運輸與保存
常溫運輸。4℃保存，有效期12個月。
使用方法
細(xì)胞培養(yǎng)
將細(xì)胞接種于孔板中（以下溶液加入量是以6孔板為例），培養(yǎng)至正常生長階段。
藥物處理
根據(jù)實驗需要進(jìn)行各種細(xì)胞處理。
EdU標(biāo)記
1.設(shè)置1個不加EdU標(biāo)記培養(yǎng)基的NC對照組，以便進(jìn)行流式檢測數(shù)據(jù)的背景分析。
2.將細(xì)胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基。
3.提前將2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后將500微升2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基與等體積細(xì)胞培養(yǎng)基混合，獲得6孔板中每孔1ml 1×EdU溶液。
【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度；②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜。
4.孵育細(xì)胞2 h，棄培養(yǎng)基。
【注】：①培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)；②大多數(shù)腫瘤細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2 h的孵育時間。
5.將細(xì)胞收集至流式管中，1000rpm 離心5 min，用槍頭吸棄上清。
【注】：①如貼壁細(xì)胞，請先消化收集；②離心轉(zhuǎn)速可按特定細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗進(jìn)行設(shè)置。
6.以1×PBS清洗細(xì)胞，1000rpm 離心5 min，用槍頭吸棄上清。
細(xì)胞的固定和通透
1.每管加入1mL 4%多聚甲醛細(xì)胞固定液固定15-30 min，1000rpm 離心5 min，棄固定液。
2.每管加入2mL 2mg/mL 甘xx，搖床孵育5 min，以中和過量的多聚甲醛。
3.1000rpm 離心5 min，棄甘xx溶液，每管加入2mL PBS洗液清洗，1000rpm 離心5 min，棄上清。
4.每管加入1mL 0.5% Triton X-100細(xì)胞通透液，室溫通透10 min，1000rpm 離心5 min，棄細(xì)胞通透溶液。
5.每管加入2mL PBS洗液，室溫清洗5 min，1000rpm 離心5 min，吸棄上清。
EDU染色
1.通過用10：1去離子水稀釋反應(yīng)緩沖液，進(jìn)行配制1×反應(yīng)緩沖液。
2.按照溶解 200 mg緩沖添加劑溶于1 mL去離子水的比例稱取適量的粉末進(jìn)行溶解，即為可用的緩沖添加劑的濃度，建議現(xiàn)用現(xiàn)配。
【注】：緩沖添加劑為白色粉末，較難準(zhǔn)確稱量，稱量范圍可稍微放寬，但是不應(yīng)超過±20%，且該粉末較易氧化，使用后請旋緊管蓋，如試劑出現(xiàn)棕黃色，則需報廢或更換。
3.按照以下的表格進(jìn)行染色反應(yīng)液的配制：
| 染色反應(yīng)液組分 | 500 μL | 1 mL | 2 mL | 5 mL |
| 1X反應(yīng)緩沖液 | 430 μL | 860 μL | 1.8 mL | 4.3 mL |
| 催化劑溶液 | 20 μL | 40μL | 80 μL | 200 μL |
| TAMRA紅色熒光溶液 | 1.2 μL | 2.5 μL | 5 μL | 12.5 μL |
| 緩沖添加劑 | 50 μL | 100 μL | 200 μL | 500 μL |
4.每管加入配置好的檢測混合液，體積以覆蓋細(xì)胞為宜，充分重懸細(xì)胞，避光、室溫孵育10-30 min。
5.1000rpm 離心5 min，吸棄染色反應(yīng)液，每管加入2mL 0.5% Triton X-100細(xì)胞滲透液清洗2次，每次10 min；離心棄細(xì)胞滲透液，用500uL PBS重懸細(xì)胞。
DNA染色
1.將Hoechst 33342 *超級純*(李記貨號：AC12L021)用PBS溶液1:1000進(jìn)行稀釋得到1×Hoechst染色液。
2.每管加入1×Hoechst染色液，以覆蓋細(xì)胞為宜，室溫避光孵育10-15 min后，棄染色液。
3.加入500 μL PBS重懸細(xì)胞。
其它染色（自備）
（可選）可以根據(jù)實驗需要進(jìn)行細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)抗原的抗體染色。染色完的樣品上機(jī)檢測時，根據(jù)使用的染料選擇合適的通道檢測。
流式檢測及分析
1.建議染色完成后立即進(jìn)行流式檢測；如果條件限制，請于4℃條件下避光濕潤保存3 d之內(nèi)完成檢測。
2.檢測細(xì)胞數(shù)量建議盡量能達(dá)到107級，若細(xì)胞數(shù)量較少，檢測的細(xì)胞數(shù)量可調(diào)整為106起始進(jìn)行實驗。
| 熒光染料 | 最大激發(fā)波長 | 最大發(fā)射波長 | 熒光顏色 |
| TAMRA | 541 nm | 567 nm | 橘紅色熒光 |
| Hoechst 33342 | 350 nm | 461 nm | 藍(lán)色熒光 |
注意事項
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
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