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          化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專用試劑>生物試劑>AC11L251 EdU細(xì)胞增殖成像分析試劑盒

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          AC11L251 EdU細(xì)胞增殖成像分析試劑盒

          參考價(jià) 880
          訂貨量 ≥1
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

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            公司前身為上海李記生物科技有限公司,成立于2015年。和元李記在2023年由和元生物和李記生物合資成立,是集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售為一體的國產(chǎn)生物試劑公司,專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域,致力于為客戶提供技術(shù)優(yōu)秀 、方便易用、經(jīng)濟(jì)高效的產(chǎn)品,產(chǎn)品范圍包括:細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)和生物化學(xué)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)試劑及試劑盒。

            目前在全國40余座城市均有授權(quán)代理;直接服務(wù)終端超千家,涵蓋CRO、藥企、高校、醫(yī)院和科研院所;李記產(chǎn)品已幫助客戶發(fā)表數(shù)百篇SCI,多篇CNS。

            優(yōu)勢產(chǎn)品:蛋白Marker、EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑、CCK-8、支原體快速檢測試劑盒、核酸染料(GelRed/GelGreen)、EZ Protein any KD PAGE蛋白電泳試劑盒、熒光染料(Alexa Fluor 488, 555, 647,CY3, cy5)、胎牛血清、細(xì)胞凋亡檢測試劑盒等。

          胎牛血清,轉(zhuǎn)染試劑(高效),凍存液(普通),cck-8,1640培養(yǎng)基,PBS液體,凋亡試劑盒,熒光素鉀鹽,蛋白Mark,發(fā)光液(超敏),快速封閉

          供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合


          EdU細(xì)胞增殖成像分析試劑盒

          產(chǎn)品描述
          細(xì)胞增殖是評價(jià)細(xì)胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團(tuán)在天然化合物中很少見,能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復(fù)制的DNA分子中,通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng),把熒光基團(tuán)標(biāo)記到新合成的含有EdU的DNA上面,這樣可以進(jìn)行高效快速的檢測出DNA復(fù)制活性,此技術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。
          傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性,只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理,能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識別位點(diǎn),操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似,大小卻只有BrdU抗體的1/500,很容易在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散;無需抗原抗體反應(yīng),能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。
          訂購信息

          產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格價(jià)格
          EdU細(xì)胞增殖成像分析試劑盒AC11L251
          100 T880

          產(chǎn)品組分

          產(chǎn)品組分規(guī)格
          EdU溶液40 μL
          反應(yīng)緩沖液1 mL
          催化劑溶液400 μL
          TAMRA 紅色熒光溶液25 μL
          緩沖添加劑200 mg
          Hoechst 3334220 μL


          運(yùn)輸與保存
          藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃保存,有效期12個(gè)月。
          使用方法(以24孔板,HK2貼壁細(xì)胞為例)
          本試劑盒是采用成像檢測方法進(jìn)行檢測,適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。以下方式適用于貼壁細(xì)胞;非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理,固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測。
          EdU標(biāo)記
          1.將細(xì)胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500:1的比例混合,制成2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基。
          2.提前將2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱,然后將150微升2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基與等體積細(xì)胞培養(yǎng)基混合,獲得1×EdU溶液。
          【注】:①不建議替換全部培養(yǎng)基,這樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配,用量以沒過細(xì)胞為宜。
          3.孵育細(xì)胞2 h,棄培養(yǎng)基。
          【注】:①培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)。②大多數(shù)腫瘤細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2 h的孵育時(shí)間。
          4.以1xPBS清洗細(xì)胞兩次,每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。
          【注】:對于貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。
          細(xì)胞的固定和通透
          1.每孔加入150μL 4%多聚甲醛細(xì)胞固定液,室溫培養(yǎng)30 min,棄固定液。
          2.每孔加入150μL 2mg/ml甘.an.suan,搖床孵育5 min,以中和過量的多聚甲醛。
          3.棄甘.an.suan.溶液,每孔加入300μL PBS 洗液,室溫清洗5 min。
          4.每孔加入 300μL 0.5% Triton X-100 細(xì)胞通透液,室溫通透10 min,棄細(xì)胞通透溶液。
          5.每孔加入300μL PBS洗液,室溫清洗 5 min。
          EdU染色
          1.通過用10:1去離子水稀釋反應(yīng)緩沖液,進(jìn)行配制1×反應(yīng)緩沖液。
          2.按照溶解200 mg緩沖添加劑溶于1 mL 去離子水的比例稱取適量的粉末進(jìn)行溶解,即為可用的緩沖添加劑的濃度,建議現(xiàn)用現(xiàn)配。
          【注】:緩沖添加劑為白色粉末,較難準(zhǔn)確稱量,稱量范圍可稍微放寬,但是不應(yīng)超過±20%,且該粉末較易氧化,使用后請旋緊管蓋,如試劑出現(xiàn)棕黃色,則需報(bào)廢或更換。
          3.按照以下的表格進(jìn)行染色反應(yīng)液的配制:

          染色反應(yīng)液組分500 μL1 mL2 mL5 mL
          1X反應(yīng)緩沖液430 μL860 μL1.8 mL4.3 mL
          催化劑溶液20 μL40μL80 μL200 μL
          TAMRA紅色熒光溶液1.2 μL2.5 μL5 μL12.5 μL
          緩沖添加劑50 μL100 μL200 μL500 μL

          4.每孔加入100 μL配置好的檢測混合液,以覆蓋細(xì)胞為宜,避光、室溫孵育30 min。
          5.棄染色反應(yīng)液,加入300 μL 0.5% Triton X-100細(xì)胞滲透液清洗2-3次,每次10 min。
          6.棄細(xì)胞滲透液,用PBS洗兩次,每次 5 min。
          DNA染色
          1.將Hoechst 33342 *超級純*(李記貨號:AC12L021)PBS溶液1:1000進(jìn)行稀釋得到1×Hoechst染色液。
          2.每孔加入150 μL 1×Hoechst染色液,室溫避光孵育20-30 min后,棄染色液。
          3.每孔加入300 μL PBS洗細(xì)胞兩次,去掉洗液。
          圖像獲取及分析
            建議染色完成后立即進(jìn)行熒光顯微鏡拍照觀察;如果條件限制,請于4℃條件下避光濕潤保存3 d之內(nèi)完成拍照。若為細(xì)胞爬片或涂片,可使用抗熒光淬滅封片劑進(jìn)行封片后于4℃條件下保存及拍照檢測。

          熒光染料最大激發(fā)波長最大發(fā)射波長熒光顏色
          TAMRA541 nm567 nm橘紅色熒光
          Hoechst 33342350 nm461 nm藍(lán)色熒光

          注意事項(xiàng)

          1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

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          Hoechst 33342 *超級純*(貨號:AC12L021)
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