293T人胚腎細胞 百歐博偉生物 細胞系

293T人胚腎細胞 百歐博偉生物 細胞系

人胚腎細胞；293，上皮狀，早期報道中指出該細胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對Ad5的插入點的克隆測序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1～4344位線性核苷酸整合入細胞染色體19q13.2。該細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主?？杀磉_異常的玻連蛋白的細胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級別為2級。

一、細胞簡介

平臺編號：bio-72947

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

拉丁屬名：293T[HEK-293T]

細胞名稱：293T（人胚腎細胞）

種屬：人

年齡（性別）：胎兒

組織來源：腎

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

背景描述：293T細胞是293 [HEK-293]細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株。

生長培養(yǎng)基：DMEM高糖(貨號:PM150210)＋10% FBS(貨號:164210-500)＋1% P/S(貨號:PB180120)

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃

傳代方法：1:10~1:20傳代，每2~3天換液1次。

傳代情況：P20

應(yīng)用領(lǐng)域：表達SV40大T抗原，可用于轉(zhuǎn)染和作為包裝細胞；用于瞬時轉(zhuǎn)染時可高表達AP融合蛋白。293細胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞系，293T細胞由293細胞派生，同時表達SV40大T抗原，含有SV40復(fù)制起始點與啟動子區(qū)的質(zhì)粒可以復(fù)制。

二、細胞培養(yǎng)方法

1、復(fù)蘇細胞

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2、傳代方法

將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿），在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

3、生長條件

37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含丙酮酸鈉。

4、生長特性

細胞貼壁不牢，加消化時，細胞會成塊脫落，幾秒就要把多余的吸走，余0.5ml多消化一會。培養(yǎng)過程中增殖緩慢，細胞密度大概在70%左右。

5、存儲條件

凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

6、細胞凍存

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

三、運輸和保存

使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入*使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

四、細胞用途：僅供科研使用。

五、注意事項

1、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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