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          探針合成實(shí)驗(yàn)步驟

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             公司承接各種實(shí)驗(yàn)代做外包服務(wù):石蠟包埋、免疫組化、HE染色、PAS染色、DNA提取、RNA提取、探針、SNP檢測(cè)、WB、EMSA、CCK8檢測(cè)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期檢測(cè)、流式、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、ROS活性氧檢測(cè)、線粒體膜電位檢測(cè)、平板克隆、軟瓊脂克隆、細(xì)胞劃痕、細(xì)胞粘附,并為廣大科研用戶提供各種高品質(zhì)的高*_端化學(xué)試劑、生物學(xué)試劑、免疫學(xué)檢測(cè),ELISA試劑盒(免費(fèi)代測(cè))、生化試劑盒、分析標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)食品安全檢測(cè)試劑、動(dòng)物疫病類檢測(cè)產(chǎn)品、獸藥殘留檢測(cè)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)等,應(yīng)用覆蓋藥物分析領(lǐng)域、食品安全領(lǐng)域、聚合物研究領(lǐng)域、環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域,客戶廣泛分布于食品、制藥、第三方檢測(cè)、環(huán)境測(cè)試機(jī)構(gòu)、化工、科研院校、生物工程等行業(yè)。


          主營(yíng):

          1生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、

          2.ELISA試劑盒、分離液、分離液試劑盒

          3.細(xì)胞:*細(xì)胞、國(guó)產(chǎn)腫瘤細(xì)胞、國(guó)產(chǎn)正常細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞

          4.食品安全檢測(cè)試劑、動(dòng)物疫病類檢測(cè)產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)試劑

          5.耗材:常用實(shí)驗(yàn)耗材、移液器


          各種實(shí)驗(yàn)代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細(xì)胞檢測(cè),食品安全檢測(cè)試劑,獸藥殘留檢測(cè)試劑,動(dòng)物疫病類檢測(cè),銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品,ELISA試劑盒,細(xì)胞,血清,等等

          產(chǎn)地類別 國(guó)產(chǎn) 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

          探針合成實(shí)驗(yàn)步驟



          探針是- -小段單鏈DNA或者RNA*片段(大約是20到500 bp), 用于檢測(cè)與其互補(bǔ)的核酸序列。雙鏈DNA加熱變性成為單鏈,隨后用放射性同位素(通常用磷-32)、螢光染料或者酶 (如辣根過氧化物酶)標(biāo)記成為探針。


          實(shí)驗(yàn)材料

          基因


          試劑、試

          劑盒


          轉(zhuǎn)錄緩沖液DTT RNA酶抑制劑CTP ATP S-UTP乙酸銨乙醇


          儀器、耗


          水溶鍋、離心機(jī)、培養(yǎng)箱、烘箱











          實(shí)驗(yàn)步驟

          1.在一個(gè)含SP6. T3或T7啟動(dòng)子的載體中,插入目的基因。在編碼序列下游酶切使質(zhì)粒呈線

          性。DNAL以酚/氨0仿抽提, 乙醇沉淀,70%乙醇洗后晾干。以無菌水重溶沉淀至1 ug/ul。

          2.室溫配置如下反應(yīng)混合液(總體積20μl) :

          (1) 4.0 ul 5x轉(zhuǎn)錄緩)沖液

          (2) 0.2 ul 1 mol/ DTT

          (3) 60 U RNA酶抑制劑

          (4) 1.0 ul三種10 mmol/l NTP中的每-種

          (5) 1.0 ul 1 ug/ul酶切DNA

          (6) 10.0μ ζ[35s] UTP

          (7) 16 U SP6或T7 RNA聚合酶

          (8) 37*C溫育30 min,再加16 U聚合酶并于37 °C溫育40 min。

          3.在反應(yīng)混合液中加入: 60 U RNA酶抑制劑,20 μl 10 mg/ml的載體RNA和1.0μl酶1,于37°C溫育10 min以除去摸板。

          4.往反應(yīng)混合液加入以下液體: 0.8 ul 1 mol/l DTT. 63 μul 無菌水和10 μI3 mol/l乙酸鈉,取出1 ul測(cè)定其cpm/ul值。

          5.加36.4μ7.5 molM的乙酸銨于反應(yīng)混合液(終濃度2 mol/)加50~100 ug tRNA載體和272ul冷無水乙醇,置干冰上沉淀10 min,以冷70%乙醇洗沉淀,晾干,需要的話可重復(fù)此步。以100μl 10 mmol/l DTT重溶DNA沉淀。


          6.確定其cpm/μl值, 并計(jì)算摻入百分比,核糖核酸探針應(yīng)于2~3天內(nèi)使用。

          (70%到90%的標(biāo)記摻入,結(jié)果可得70~90 ng標(biāo)記的RNA)





          收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:

          歡迎咨詢?cè)斦劊覀儠?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。

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