10186ES70 全血直接PCR試劑盒
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 10186ES70
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2022/2/9 15:18:46
- 訪問次數(shù) 815
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企業(yè)簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進化技術(shù)為驅(qū)動，聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細(xì)胞三大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)，通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑，成為國內(nèi)少數(shù)同時覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)模化生產(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè)，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域、診斷與檢測領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
主營業(yè)務(wù)
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良、類型齊全、種類豐富的產(chǎn)品管線。自公司成立以來，公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子、蛋白、細(xì)胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉(zhuǎn)錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉(zhuǎn)錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細(xì)胞分析系列、細(xì)胞培養(yǎng)系列、細(xì)胞轉(zhuǎn)染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽資質(zhì)
翌圣生物通過申請商標(biāo)和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場競爭力，不斷加強公司品牌建設(shè)。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項（其中發(fā)明14項、實用新型1項、外觀設(shè)計3項）和45項與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國家知識產(chǎn)權(quán)局商標(biāo)局核準(zhǔn)的注冊商標(biāo)權(quán)37項以及4項境外注冊商標(biāo)，是國家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè)。
創(chuàng)新平臺
經(jīng)過多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產(chǎn)學(xué)研”合作，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國家重點實驗室的湖北大學(xué)、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點研究基地的江南大學(xué)展開合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達工藝。翌圣生物以基因工程技術(shù)、生物信息技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺——雙向分子酶理性設(shè)計與定向進化平臺、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺、高通量測序建庫試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項核心技術(shù)，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑，覆蓋技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品升級、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準(zhǔn)GMP 標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)運營的工業(yè)化生產(chǎn)基地，配有噸級發(fā)酵線、工業(yè)級 AKTA 純化線和全自動包裝線。同時，公司通過了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認(rèn)證，從原料控制、生產(chǎn)管理、質(zhì)檢管控、倉儲運輸?shù)葘ιa(chǎn)線進行360度管理監(jiān)督，保證產(chǎn)品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品。
客戶服務(wù)
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量、高效及時的響應(yīng)能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認(rèn)可，為檢測公司、治療公司、工具類公司和科學(xué)研究實驗室提供應(yīng)用于科學(xué)研究、體外診斷、基因測序、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國科學(xué)院、清華大學(xué)、北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定、緊密的合作關(guān)系，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science、Cell等國際頂級期刊論文發(fā)表中。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂”的使命，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級，不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù)，助力我國打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時，翌圣生物將進一步推進國際化戰(zhàn)略，繼續(xù)布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻力量。
分子生物學(xué)試劑，細(xì)胞生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑，蛋白組學(xué)試劑等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye) 全血直接PCR試劑盒 | 10186ES50 | 50 T | 323.00 |
Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye) 全血直接PCR試劑盒 | 10186ES70 | 200 T | 983.00 |
產(chǎn)品描述
全血直接PCR試劑盒是一款可以直接對全血樣本進行PCR擴增的試劑盒，無需DNA提取或樣品處理，大大降低了污染風(fēng)險，縮短了檢測時間。
試劑盒中包含配方優(yōu)化的2× Blood Master Mix，具有很強抑制物耐受性，人血的模板大加入量可達45%，鼠血的可達20%，可以靈敏的擴增血液樣本中基因組和外源目的DNA篇段。2× Blood Master Mix包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，擴增產(chǎn)物末端加A，適用于Hieff Clone®快速克隆試劑盒（貨號：10907ES60/10908ES60）。
該試劑盒可用于直接擴增的血樣類型包括：新鮮血液、4℃貯存血液、冷凍血液以及儲存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干xue漬，且兼容所有常規(guī)抗凝劑（EDTA、檸檬酸鹽、肝素等）。適用樣本來源包括人血、鼠血、雞血、鳥血、牛血、狗血等。
產(chǎn)品組分
編號 | 組分 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | |
10186ES50（50T） | 10186ES70（200T） | ||
10186-A | 2× Blood Master Mixa | 500 µL | 1 mL× 2 |
a）2× Blood Master Mix：包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、PCR反應(yīng)增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等，產(chǎn)品已混合溴酚藍(lán)染料（不含SDS），PCR產(chǎn)物可以直接進行電泳。
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存。避免反復(fù)凍融。
操作方法
1. PCR反應(yīng)體系配制
組分 | 體積（μL） | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Blood Master Mix | 10 | 25 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
抗凝全血 | X | X | - |
ddH2O | To 20 | To 50 | - |
【注】：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
a）模板使用量：進行基因組上的目的片段檢測，建議使用少量的血液量作為模板；檢測血液樣本中某種病毒或細(xì)菌等的目的片段，建議擴大PCR體系并使用較大量的血液模板。血液模板多占PCR體系的45%（人血）、20%（鼠血）。若模板使用含有血液的采集卡，可截取直徑1-4 mm的血點，直接加入20-50 μL PCR反應(yīng)體系進行擴增。
b）引物濃度：通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-0.5 μM之間進行調(diào)整。
c）反應(yīng)體系：推薦使用20 μL或 50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復(fù)性。
d）體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應(yīng)液集于管底。
2. PCR反應(yīng)條件設(shè)置
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
變性 | 95℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50℃～65℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】： a）預(yù)變性：95℃，5 min可以讓白細(xì)胞裂解，釋放可用于PCR擴增的基因組DNA。請勿縮短時間或降低溫度。
b）退火溫度：退火溫度設(shè)置為引物Tm值即可。然而，使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴增，并提高全血模板的擴增效率。因此，如擴增產(chǎn)物特異性較差，可以建立一個溫度梯度反應(yīng)去尋找引物模板適退火溫度。
c）延伸時間：按30 sec/kb設(shè)定，如不足30 sec，設(shè)置30 sec即可。
d）擴增循環(huán)數(shù)：35個循環(huán)已可以擴增足量產(chǎn)物。太多的循環(huán)將會導(dǎo)致非特異性擴增增加。
3. 擴增產(chǎn)物分析
PCR完成后，建議將反應(yīng)液于1000× g (大約4000 rpm) 離心1～3 min以沉淀血細(xì)胞碎片，之后取上清進行下游分析。該步驟可有效去除多種血液組分。當(dāng)使用高濃度血液模板時此步尤為重要，因為經(jīng)過PCR循環(huán)，反應(yīng)管中會存在大量的血細(xì)胞碎片。這些碎片會干擾下游的檢測，如瓊脂糖電泳檢測。注意：由于血液本身的原因，PCR 結(jié)束后在 PCR 管的底部會出現(xiàn)透明凝膠狀物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象。
4. 對照反應(yīng)
在PCR結(jié)果分析時，不管是陽性結(jié)果或陰性結(jié)果，如果沒有對照反應(yīng)，都不能確定結(jié)果是否可靠。為了便于后續(xù)實驗結(jié)果的分析，建議在進行PCR時，設(shè)置陽性和陰性PCR對照反應(yīng)以便于排除假陽性或假陰性的干擾。
4.1 陽性對照反應(yīng)體系
組分 | 體積（μL） | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Blood Master Mix | 10 | 25 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
模板DNA | X | X | 100-200 ng |
ddH2O | To 20 | To 50 | - |
【注】：a）模板DNA：選用樣本純化的DNA。
b）引物的選擇：建議選擇該樣本較易擴增的基因的引物，如 β-actin 基因或 GAPDH 等。
4.2 陰性對照
PCR反應(yīng)體系被污染會導(dǎo)致PCR結(jié)果出現(xiàn)假陽性，需要設(shè)置陰性對照來排除。將使用的移液器槍頭浸泡在2× Blood Master Mix中，添加引物，ddH2O進行PCR擴增；另取ddH2O作為模板，用目的基因引物進行PCR擴增，以排除PCR體系是否被污染和實驗是否有其他污染源。
注意事項
1. 盡量使用新鮮抗凝血。若凍存血，應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 解凍后2× Blood Master Mix可能出現(xiàn)渾濁，冰上放置1-2 min，待溶液澄清后，上下顛倒混勻，不影響試劑性能。
3. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi)，以便擴增效率*。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
常見問題與解決方法
常見問題 | 可能原因 | 解決方法 |
陽性對照、待測樣本均無條帶。 | PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。 | 使用梯度PCR摸索PCR *反應(yīng)條件。 |
PCR試劑保存不當(dāng)失去活性。 | 2× PCR Mix應(yīng)保存于-20℃，使用時避免反復(fù)凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。 | |
引物設(shè)計問題。 | 嘗試重新設(shè)計引物進行檢查。 | |
陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱。 | 血液樣本保存不當(dāng)，基因組DNA降解。 | 抗凝全血可在4℃保存2-8天，需長時間保存可將樣本置于在-20℃或-70℃凍存，并避免反復(fù)凍融。 |
模板加入量不適合。 | 可在PCR體系10%-30%范圍內(nèi)優(yōu)化血液加入量；若是擴增血液樣本中的病毒或細(xì)菌DNA篇段，可將模板量增加至30%-40%。 | |
PCR循環(huán)數(shù)不足。 | 適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因為模板復(fù)雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的 DNA模板多5-10個循環(huán)為佳。 | |
非特異性擴增 | PCR退火溫度太低，循環(huán)數(shù)、引物濃度或模板濃度太高。 | 增加PCR退火溫度，降低PCR循環(huán)數(shù)、引物濃度或模板濃度。 |
PCR引物錯配。 | 重新設(shè)計PCR引物。 | |
配制PCR反應(yīng)體系時溫度太高或配制完成后放置時間太久。 | PCR反應(yīng)體系的配制在低溫下進行，配制完成后盡快進行PCR擴增反應(yīng)。 | |
陰性對照出現(xiàn)目的條帶 | 操作工具或試劑污染。 | 實驗所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外。 |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒 | 10180ES50/70 | 50/200 T | 383/1353 |
Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠組織直接PCR試劑盒HOT | 10181ES50/70 | 50/200 T | 293/883 |
Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒 | 10182ES50/70 | 50/200 T | 293/883 |
Plant Tissue PCR Kit 植物組織直接PCR試劑盒HOT | 10183ES50/70 | 50/200 T | 353/1213 |
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 動物組織直接PCR試劑盒 | 10184ES50/70 | 50/200 T | 433/1453 |
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 小鼠組織直接PCR試劑盒 | 10185ES50/70 | 50/200 T | 323/983 |
Plant Tissue PCR Kit (With Dye) 植物組織直接PCR試劑盒 | 10187ES50/70 | 50/200 T | 393/1353 |
HB190220
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