MatTek組織模型蛋白抗體染色MatTekA37518

MatTek組織模型蛋白抗體染色MatTekA37518

黑色素瘤模型由人類惡性黑色素瘤細(xì)胞（A375），正常的人源性表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（NHEK）和正常的人源性皮膚成纖維細(xì)胞（NHDF）組成，已培養(yǎng)形成多層，高度分化的表皮，黑色素瘤細(xì)胞位于CM惡性腫瘤的各個(gè)階段。在培養(yǎng)的不同階段，組織表現(xiàn)出放射狀生長(zhǎng)期（RGP），垂直生長(zhǎng)期（VGP）或轉(zhuǎn)移性黑素瘤表型。使用無(wú)血清培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)插入物上培養(yǎng)細(xì)胞，并在體外皮膚技術(shù)的前沿達(dá)到分化水平。從結(jié)構(gòu)上講，黑色素瘤模型與體內(nèi)黑色素瘤的進(jìn)展密切相關(guān)，從而為研究，了解和開發(fā)針對(duì)嚴(yán)重的皮膚惡性腫瘤之一的預(yù)防和治療方法提供了有價(jià)值的工具。

黑色素瘤模型表現(xiàn)出均勻且高度可重復(fù)的體內(nèi)樣形態(tài)和生長(zhǎng)特征。這種全厚度皮膚模型的表皮由類似于體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的有組織的基底，棘突，顆粒狀和角質(zhì)化表皮層組成。真皮隔室由膠原蛋白基質(zhì)組成，該膠原蛋白基質(zhì)含有活的正常人真皮成纖維細(xì)胞（NHDF）。

使用黑色素瘤組織的方案清晰明了。MatTek的黑色素瘤組織已與多種靶向和抗黑色素瘤藥物一起使用。全厚度黑色素瘤皮膚模型中的人類轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞（A375）。A375細(xì)胞在真皮/表皮連接處發(fā)展為RGP黑色素瘤（第11天）。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，黑色素瘤淋巴結(jié)呈VGP形態(tài)（第18天），隨后分離出的細(xì)胞簇侵入真皮（轉(zhuǎn)移性侵襲）（第29天）。長(zhǎng)箭頭表示在表皮-真皮連接處的黑色素瘤細(xì)胞簇。短箭頭顯示滲透到真皮的分離的黑色素瘤細(xì)胞團(tuán)。

全層皮膚黑色素瘤模型（MLNM-FT-A375）的透射電子顯微照片（TEM）。A.黑色素瘤細(xì)胞（M）和角質(zhì)形成細(xì)胞（KC）的相互作用區(qū)域。B.黑色素瘤細(xì)胞與下面的真皮基質(zhì)相互作用的區(qū)域（D）。N，核，n，核仁。箭頭表示凋亡的黑色素瘤細(xì)胞

包含轉(zhuǎn)移性SK-Mel-28細(xì)胞的全層皮膚黑色素瘤模型（MLNM-FT）。S-100抗體染色。初，黑色素瘤細(xì)胞的小巢在真皮/表皮連接處形成（第11天）。后來(lái)出現(xiàn)VGP腫瘤（第25天），隨后觀察到轉(zhuǎn)移到真皮中（第29天）。長(zhǎng)箭頭表示在表皮-真皮連接處的一些黑色素瘤細(xì)胞簇。短箭頭顯示單個(gè)黑色素瘤細(xì)胞浸潤(rùn)真皮。

N-鈣黏著蛋白粘附分子在MLNM-FT-A375全厚度黑色素瘤皮膚模型中的表達(dá)。N-鈣黏著蛋白抗體染色，40X。注意隨著時(shí)間的流逝，N-鈣黏著蛋白表達(dá)水平增加。

組織：

試劑盒：全厚度黑素瘤皮膚構(gòu)建物（MLNM-FT-A375試劑盒）由24個(gè)組織組成。（組織“套件”包含組織，少量培養(yǎng)基和塑料制品；有關(guān)特定套件的內(nèi)容，請(qǐng)與MatTek聯(lián)系。）

底物：使用單孔組織培養(yǎng)板插入物（例如Millicell CM單孔組織培養(yǎng)板插入物，孔徑= 0.4 µm，表面積= 0.6 cm2）。

文化：初被淹沒，然后進(jìn)入氣液界面。

組織學(xué)：上皮：8-12個(gè)上皮細(xì)胞層加上角質(zhì)層（基底層，棘層和顆粒層）；真皮：含有成纖維細(xì)胞的膠原蛋白凝膠。在早期階段，黑素瘤細(xì)胞在真皮/表皮連接處形成淋巴結(jié)。在后期，黑素瘤發(fā)展為RGP（放射狀生長(zhǎng)期），VGP（垂直生長(zhǎng)期）并連續(xù)侵襲皮膚成分。

批號(hào)：每周生產(chǎn)的薄紙批被分配一個(gè)特定的批號(hào)。批號(hào)的末尾附加一個(gè)字母，以區(qū)分給定批組織中的各個(gè)試劑盒。批次內(nèi)的所有組織試劑盒在細(xì)胞，培養(yǎng)基，處理，培養(yǎng)條件等方面都是相同的。

裝運(yùn)：將組織在4攝氏度下在6孔板中的中等添加瓊脂糖凝膠上運(yùn)輸。

發(fā)貨日：星期一。如有特殊要求，也可以在周四發(fā)貨。

交貨時(shí)間：周二上午，通過(guò)FedEx優(yōu)先服務(wù)（美國(guó)）。美國(guó)以外地區(qū)：星期二至星期四，具體取決于位置。

保質(zhì)期：包括運(yùn)輸時(shí)間在內(nèi)，在使用前，可將組織在4°C下多保存3天。但是，除非有必要，否則不建議延長(zhǎng)存儲(chǔ)時(shí)間。此外，如果在同一天（例如，星期二下午或在4°C下過(guò)夜存儲(chǔ)（星期三早晨）??）一致使用薄頁(yè)紙，則可獲可重復(fù)性。

實(shí)驗(yàn)時(shí)間：對(duì)于黑色素瘤的發(fā)生和發(fā)展，可以持續(xù)長(zhǎng)達(dá)4周的培養(yǎng)，并且保留了正常的表皮形態(tài)。必須每隔一天使用MatTek培養(yǎng)臺(tái)（MEL-STND；點(diǎn)擊此鏈接查看照片）以及5.0毫升MLNM-FT-MM進(jìn)行培養(yǎng)。

替代紙巾：

MLNM-FT-A375（第6天）：早期MLNM-FT-A375組織。尚未在氣液界面上培養(yǎng)組織?？蛻羰盏剿璧拿襟w（MLNM-FT-GM）以繼續(xù)培養(yǎng)并生產(chǎn)MLNM-FT-A375。由于該產(chǎn)品的專有性，在訂購(gòu)前需要與MatTek技術(shù)代表進(jìn)行討論。專為研究黑色素瘤發(fā)展的早期階段而設(shè)計(jì)，其中實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)指示了早期組織的使用。

MLNM-FT-EXP：與MLMN-FT-A375相同，只是MatTek用客戶提供的黑色素瘤細(xì)胞替代了A375細(xì)胞。

細(xì)胞：

類型：人黑素瘤細(xì)胞（A375）；正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（NHEK）；正常人皮膚成纖維細(xì)胞（NHDF）。

來(lái)源：惡性黑色素瘤細(xì)胞系（A375）；新生兒包皮組織（NHEK）；新生兒皮膚（NHDF）；

替代品：人惡性黑色素瘤細(xì)胞SK-Mel-28。

篩查： HIV，乙型肝炎，丙型肝炎，支原體。

介質(zhì)：

基本培養(yǎng)基： MCDB 153基本培養(yǎng)基。

生長(zhǎng)因子/激素：表皮生長(zhǎng)因子，胰島素，和其他專有的表皮分化刺激劑。

血清：無(wú)。

抗生素：慶大霉素5 µg / ml（慶大霉素正常水平的10％）。

抗真菌劑：兩性霉素B 0.25 µg / ml。

pH指示劑：酚紅（0.0012 g / l）。

其他添加劑：用于增強(qiáng)表皮屏障形成的脂質(zhì)前體（專有）。

分析/維護(hù)介質(zhì)： MLNM-FT-MM用于MLNM-FT-A375組織的分析以及長(zhǎng)期維護(hù)。

質(zhì)量控制和無(wú)菌性：

目視檢查：目視檢查所有薄頁(yè)紙，如果發(fā)現(xiàn)物理缺陷，則拒絕運(yùn)送薄紙。

終用途測(cè)試：將生產(chǎn)批次的組織保留下來(lái)，再培養(yǎng)7天，進(jìn)行組織學(xué)固定和分析。

無(wú)菌：檢查整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程中使用的所有介質(zhì)的無(wú)菌性。將維持培養(yǎng)基在有或沒有抗生素的情況下孵育1周，并檢查其無(wú)菌性。還將用于運(yùn)輸?shù)?4孔板的瓊脂糖凝膠孵育1周，并檢查是否有任何污染跡象。

病原體篩查：使用PCR對(duì)所有細(xì)胞進(jìn)行篩查，并對(duì)HIV，乙型肝炎和丙型肝炎呈陰性。但是，沒有已知的測(cè)試方法可以*保證細(xì)胞不含病原體。因此，應(yīng)按照CDC-NIH手冊(cè)“微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物安全性”（1998年）中的建議，將這些產(chǎn)品和所有人類衍生產(chǎn)品的處理水平定為BSL-2級(jí)（生物安全級(jí)2級(jí)）或更高。有關(guān)更多幫助，請(qǐng)聯(lián)系您的站點(diǎn)安全員或MatTek技術(shù)服務(wù)。

批次失敗的通知：如果薄紙批次未通過(guò)我們的質(zhì)量控制或無(wú)菌測(cè)試，則將通知客戶，并在適當(dāng)時(shí)免費(fèi)更換薄紙。由于我們的質(zhì)量控制和無(wú)菌測(cè)試是在裝運(yùn)后進(jìn)行的，因此將盡快進(jìn)行通知（在正常情況下，無(wú)菌故障將在裝運(yùn)后的8天內(nèi)通知）。