一、Oligo高通量DNA合成儀用于合成結構上類似DNA或RNA的寡核苷酸的自動化儀器。一般應用于固相合成法，每次將一個核苷酸加到所接長的寡核苷酸鏈上，加入每一個核苷酸都利用相同的化學反應與相應的嘌呤或嘧啶堿基衍生物作用。

二、Oligo高通量DNA合成儀的特點：

（1）包括一個靈活的合成協(xié)議編輯器，它允許操作員修改所包含的協(xié)議，并將它們保存在一個新名稱下，或者從頭開始編寫協(xié)議。協(xié)議編輯可以在Excel中完成。對于不同的合成規(guī)模和序列長度，很容易編輯特殊協(xié)議。比如，可以給耦合緩慢的堿基對一個特別的延長的耦合時間。如果必要的話，可以給所有單體額外的耦合反應時間。

（2）軟件簡單易用。在計算機或平板的Excel表中創(chuàng)建運行數(shù)據(jù)后，可使用Wi-Fi等網(wǎng)絡連接或標準U盤傳輸?shù)絻x器上。實驗運行中，可以從PC端收集實驗數(shù)據(jù)監(jiān)測實驗結果。

（3）性能：

OligoMakerX12可以在1小時內(nèi)平行合成12條20對的寡核苷酸。  

OligoMaker48可以在2小時內(nèi)平行合成多達48條20對的寡核苷酸。  

OligoMaker96可以在3小時內(nèi)平行合成多達96條20對的寡核苷酸。  

OligoMaker192可以在4小時內(nèi)平行合成多達192條20對的寡核苷酸。  

（4）可在IUPAC-IUB標準規(guī)則下合成10、50、200和1000nmol規(guī)模的核苷酸。  

（5）兩個反應盤，一個盤可以加載和合成核苷酸，另一個盤準備進行凈化步驟。  

OligoMaker48可以升級為OligoMaker96和OligoMaker192；  

OligoMaker96可以升級為OligoMaker192。  

（6）DNA的固相合成。即DNA3'端固定于基質(zhì)上，然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應用DNA聚合酶的DNA合成。

三、合成過程：

*個堿基的3‘末端固定在樹脂上，下一個堿基的5’-OH用二對甲氧三苯甲基DMT保護，堿基上的氨基用苯甲酸保護，然后對3‘-OH用氨基磷酸化合物進行活化。

1。1個堿基的5’-OH和下個堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯，  

2。然后用碘氧化成磷酸三酯  

3。加入C2H6CL2除去第二個堿基5’-OH上的保護劑DMT循環(huán)進行加入下一個堿基合成完畢后  

四、亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有：保護堿基的5／—DMT，A、G、C、T亞磷酰胺單體，四唑偶聯(lián)催化劑，乙酐，N—甲基咪唑封閉試劑，TCA脫保護溶液，12氧化混合物，乙腈清洗溶劑，氨水切除溶液。

五、使用步驟如下：

1、仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量，必要時換掉試劑瓶，特別注意乙腈的量，因為該溶劑用量較大。  

2、將標記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。  

3、將要合成的DNA序列輸入合成儀。  

4、檢查選擇的合成步驟是否正確。  

5、選擇結束方法：TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài)，若打算以5，—DMT基團連接純化寡核苷酸，將其轉變?yōu)門ritylOnAuto結束狀態(tài)。  

6、選擇結束方法，一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。  

7、在每個柱監(jiān)視器的Username下，輸入你所希望的保存名字。  

8、以代碼代替相應的DNA序列標記每一個收集瓶。  

9、打印出每一個柱設置的詳細資料。  

10、檢查打印出來的資料是否正確。  

11、運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置，確保合成儀上合成柱處于正確的位置。  

12、檢查連接在合成儀上的溶劑殘留（廢液瓶）是否充滿。  

13、如果分部收集器用來收集每個DMT脫保護步驟的流出物，確保試管充分清潔干凈，并打開分部收集器，確保DMT廢液管路通向分部收集器。  

14、啟動循環(huán)，運行開始程序清洗試劑管路，除去原來的試劑。

六、注意：TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT，并將其從固相載體上切下來，儲存在收集瓶中；TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有保護基團，將其從固相載體上切下來，儲存在收集瓶中；TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來，而是保留在合成柱中；TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有保護基團，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來，而是保留在合成柱中。