原位雜交(FISH、FISH、IF三染)
- 公司名稱 上海信帆生物科技有限公司
- 品牌 GEMIG
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2024/11/22 16:33:36
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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原位雜交(FISH、FISH、IF三染)
服務(wù)介紹:
原位雜交與免疫熒光原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體或抗原上,與其相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
通過(guò)原位雜交雙探針及免疫熒光進(jìn)行三標(biāo),可以在組織細(xì)胞中對(duì)核酸分子和蛋白指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行共定位、以及定性分析,可以用來(lái)從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。
名稱 | 規(guī)格 |
原位雜交(FISH、FISH、IF三染) | 張 |
實(shí)驗(yàn)流程:
石蠟切片熒光探針原位雜交雙探針與免疫熒光三染實(shí)驗(yàn)步驟
1. 組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水;
2. 消化:切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘,滴加蛋白酶K消化;
3. 預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液,37°C孵育1h。
4. 雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針probe1+probe2 雜交液, 濃度 ,恒溫箱 度雜交過(guò)夜。
5. 雜交后洗滌:SSC洗滌;
6. 孵育一抗、二抗:滴加一抗,4℃過(guò)夜,后PBS洗3×5min;滴加相應(yīng)二抗,室溫孵育50min,PBS洗3×5min;
7. DAPI復(fù)染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min;
8. 鏡檢拍照;
送樣要求:
1、切片前處理要求:新鮮組織干冰運(yùn)輸后做冰凍切片;或取2mm左右厚度的新鮮組織,5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定,4℃低溫保存運(yùn)輸,切勿冷凍結(jié)冰,盡快包埋切片后進(jìn)行原位雜交實(shí)驗(yàn),固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)影響核酸檢出率;
2、冰凍切片:冰凍切片-20℃運(yùn)輸;
3、石蠟切片:石蠟切片常溫運(yùn)輸;
4、細(xì)胞爬片:細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后,換無(wú)酶PBS,密封,4℃運(yùn)輸。
單據(jù)填寫:
1、探針合成:需提供待測(cè)目的基因序列或基因登錄號(hào)、所需標(biāo)記類型;
2、自帶探針需告知完整探針信息;
3、寫明檢測(cè)要求。