化學(xué)合成的多肽抗原是小分子, 本身很難具有好的抗原性,只能誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生很弱的免疫反應(yīng),因而與載體蛋白交聯(lián)是很重要的。載體蛋白含有很多抗原決定基,能夠刺激T-幫助細(xì)胞,進(jìn)而誘導(dǎo) B-細(xì)胞反應(yīng)。用于與多肽交聯(lián)的載體蛋白有多種,其中zui常用的是keyhole limpet hemacyanin (KLH), 牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA), 卵清蛋白(ovalbumin,OVA)和牛甲狀腺球蛋白(bovine thyroglobulin,THY)。KLH具有更高的抗原性,是zui為常用的多肽交聯(lián)載體。BSA也常用來作為多肽載體,但由于BSA經(jīng)常被用做檢測(cè)試驗(yàn)的阻斷劑而使得該方法生產(chǎn)的抗體在應(yīng)用上存在著一定的局限性。
設(shè)計(jì)合成性多肽常常被忽略的一個(gè)方面是如何將多肽交聯(lián)到載體蛋白上。例如,N-端序列需要通過C-端氨基酸交聯(lián),而C-端序列則需要通過N-端氨基酸交聯(lián)。內(nèi)部序列則可以交聯(lián)到任何一端。內(nèi)部序列交聯(lián)的另一考量則是將非共軛端酰基化或氨基化,因?yàn)樵鞍追肿有蛄兄胁粫?huì)含有帶電荷的末端。zui常用的交聯(lián)方法都是基于自由氨基(alph-氨基 或 Lys)、sufhydryl (Cys)或羧基集團(tuán)(Asp, Glu, 或 alpha-羧基)的存在。所有的交聯(lián)方法都應(yīng)該是通過羧基或氨基端殘基將多肽交聯(lián)到載體蛋白上。所選序列不能有多個(gè)殘基都能參與所選交聯(lián)化學(xué)反應(yīng)。如果多個(gè)反應(yīng)位點(diǎn)存在,可以考慮將多肽序列縮短,或者選擇所有反應(yīng)位點(diǎn)都位于一端的多肽。對(duì)于內(nèi)部序列通常會(huì)使用離所預(yù)測(cè)抗原位點(diǎn)較遠(yuǎn)的一端進(jìn)行交聯(lián),這樣可以避免可能的屏蔽問題
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