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貨物所在地：上海上海市
所在地： 中國
更新時間：2024-11-27 10:27:58
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細胞名稱：16HBE人支氣管上皮細胞ATCC
細胞代次：P4
細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）
細胞凍存：無血清凍存液
細胞傳代：第一次建議1:2
細胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進行對比培養(yǎng)）
培養(yǎng)步驟
細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下細胞傳代：
A1、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
A2、懸浮細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm
離心5min；
2、棄上清，沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）
3、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存
放 24 小時以上。
B1、對于貼壁細胞，傳代可參考如下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，使之脫落后吸出，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。
4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
B2、貼壁細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；
3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。
細胞復(fù)蘇：
1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、棄上清，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4、第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
YS003C16HBE人支氣管上皮細胞
YS004C293A人胚腎細胞
YS005C293T人胚腎細胞
YS006C3T3成纖維細胞
YS007C3T3L1小鼠脂肪細胞
YS008C3T3A31小鼠胚胎成纖維細胞
YS009C4T1小鼠乳腺癌細胞
YS010C769-P腺癌細胞人腎細胞
YS011C786-O腺癌細胞人腎透明細胞
YS012C801-D性肺癌細胞人巨細胞
YS013C低轉(zhuǎn)移肺癌95-C細胞
YS014C95-D人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞
YS015CA172瘤細胞人膠質(zhì)母細胞
YS016CA2人腺樣囊性癌細胞
YS017C橫紋肌肉瘤A-204細胞
YS018CA2780人卵巢癌細胞
YS019CA3白血病細胞人T淋巴細胞
YS020CA375人惡性黑色素瘤細胞
YS021CA-431人表皮癌細胞
YS022CA498腎癌細胞
YS023CA549肺腺癌細胞
YS024CA7r5大鼠胸主動脈平滑肌細胞
YS025C黑色素瘤A875細胞
YS026CAcc-2人涎腺腺樣囊性癌細胞
YS027CAcc-3人涎腺腺樣囊性癌細胞
YS028CACHN腺癌細胞人腎細胞
YS029CAGS人胃癌細胞
YS030CAM人腺樣囊性癌細胞（高轉(zhuǎn)移）
YS031CAna-1小鼠巨噬細胞
YS032CAsPc-1人轉(zhuǎn)移胰腺癌細胞
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